目的：　　1.了解2012～2014年间温州医科大学附属第一医院临床分离的耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌对临床常见抗菌药物的耐药情况，为临床有效控制鲍曼不动杆菌感染和合理使用抗菌药物提供理论依据。　　2.探究耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌对替加环素耐药可能存在的机制，为有效预防鲍曼不动杆菌替加环素耐药株的出现提供理论基础。　　3.研究替加环素非敏感鲍曼不动杆菌的分子流行特性，从而控制多重耐药菌株的院内传播，延长替加环素在临床上的使用寿命。　　方法：　　1.回顾性调查2012年至2014年间临床分离碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌的感染分布和耐药情况;应用Vitek2 Compact全自动微生物分析仪对临床常用抗菌药物进行药物敏感性检测;应用微量肉汤稀释法、琼脂稀释法和E-test方法检测鲍曼不动杆菌对替加环素的耐药情况。　　2.采用微量肉汤稀释法测定120株鲍曼不动杆菌对替加环素的MIC值，根据EUCAST标准，将菌株分为鲍曼不动杆菌替加环素敏感菌株(TSAB)和替加环素非敏感菌株（TNAB）两组;PCR方法检测两组菌株中外排泵基因adeB、adeJ、 adeG、abeM、 adeE和外排泵调控基因adeRS以及tetX和tetX1基因的携带情况。　　3.应用实时荧光定量PCR检测13株TNAB和其中8株TSAB菌株外排泵基因adeB、adeJ、 adeG和abeM的表达情况。　　4.检测所有TNAB和1株TSAB菌株在加入10μ g/ml外排泵抑制剂羰基氰化物间氯苯腙（carbonylcyanidem-chlorophenylhydrazone，CCCP）前后菌株对替加环素的MIC值变化情况。　　5.应用脉冲场凝胶电泳（Pulsed field gel electrophoresis，PFGE）及多位点序列分型（Multilocus sequence typing，MLST）分析替加环素非敏感鲍曼不动杆菌的分子流行特性。　　结果：　　1.369株耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌主要来源于痰液，占88.6％(327/369)，其次为血液3.0％(11/369)，创面2.2％(8/369)，其他标本如脓液、尿液、引流液、导管、脑脊液和敷料等占6.2％(23/369)。鲍曼不动杆菌感染病区的分布主要以ICU为主，占60.7％(224/369)，其次为神经外科和脑外科，占12.5％(46/369)，呼吸内科占8.4％(31/369)，烧伤外科占5.1％(19/369)。369株耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌对替加环素以外的其他临床常见抗菌药物耐药现象非常严重，耐药率均达到90％以上，头孢曲松、头孢他啶、环丙沙星、氨曲南、哌拉西林/他唑巴坦甚至达到100％。　　2.微量肉汤稀释法检测结果发现120株耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌对替加环素的MIC值范围为0.25～8μg/ml，其中TNAB13株，包括中介8株，耐药5株。120株耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌中adeR和adeS基因的检出率分别为90.0％(108/120)和92.5％(111/120)，adeB、adeJ、 adeG和adeM基因的检出率均为94.2％(113/120)，而adeE、tetX和tetX1基因均为阴性。经过x2检验，TNAB组和TSAB组相比，外排泵基因检出率无显著性差异。　　3.与TSAB菌株相比，TNAB菌株adeB和adeJ基因表达量平均分别提高了18.69和5.46倍，而adeG和abeM基因表达量无明显提高（分别为1.51和1.04倍）。　　4.在加入外排泵抑制剂CCCP后，13株TNAB菌株中8株(B3、B5、B6、B7、B8、B9、B11和B12)的MIC值降低4倍以上，为外排泵阳性菌株，其余5株TNAB的MIC值均下降2倍，而TSAB菌株的MIC没有变化。　　5.PFGE结果显示替加环素非敏感鲍曼不动杆菌属于同一个克隆型;MLST显示共存在8种ST型，包括4种新的ST型，分别为ST1142、ST1143、ST1144和ST1145，其中ST191为本研究TNAB的主要ST型，属于克隆复合体(Clonal Complex, CC)92。　　结论：　　1.本院临床分离的耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌主要分离自痰液，主要分离病区为ICU，对临床常见的抗菌药物耐药非常严重，而替加环素的敏感率较高，但2013年和2014年我院仍分离出13株替加环素非敏感鲍曼不动杆菌。　　2.本院耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌对替加环素敏感性下降的主要原因是外排泵基因adeB和adeJ的过度表达，而外排泵系统adeFGH和abeM可能与鲍曼不动杆菌替加环素耐药无关，具体机制尚需进一步研究。　　3.本研究通过PFGE和MLST对TNAB菌株的流行病学分析，结果表明TNAB菌株在院内存在着克隆播散现象，其中ST191为主要流行的ST型，CC92为主要流行的克隆复合体。