【摘 要】
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目的 探讨小分子黄酮类化合物7,8-二羟基黄酮（7,8-dihydroxyflavone,7,8-DHF）与施万细胞（Schwann cells,SCs）联合移植到大鼠脱细胞异体神经支架（acellular nerve allograft,ANA）修复大鼠坐骨神经缺损,检测联合治疗对移植ANA中脑源性神经营养因子（brain derived neurotrophic factor,BDNF）、酪氨
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目的 探讨小分子黄酮类化合物7,8-二羟基黄酮（7,8-dihydroxyflavone,7,8-DHF）与施万细胞（Schwann cells,SCs）联合移植到大鼠脱细胞异体神经支架（acellular nerve allograft,ANA）修复大鼠坐骨神经缺损,检测联合治疗对移植ANA中脑源性神经营养因子（brain derived neurotrophic factor,BDNF）、酪氨酸激酶B（tyrosine kinase B,Trk B）及移植SCs存活的影响,明确联合治疗对坐骨神经损伤后髓鞘生成、轴突再生及功能重建的作用,阐明联合治疗修复坐骨神经损伤的作用机制,为周围神经损伤提供新的联合治疗策略。材料和方法 取大鼠坐骨神经进行SCs细胞分离和原代培养,S-100免疫荧光染色鉴定。化学萃取脱细胞方法制备大鼠ANA。45只成年Sprague Dawley（S-D）大鼠随机分为:（1）ANA组:注入50μL PBS于ANA;（2）SCs组:注入等剂量PKH26标记SCs（2×10~6个/50μL）于ANA;（3）7,8-DHF+SCs组:PKH26标记SCs（2×10~6个/50μL）联合7,8-DHF（500 n Mol/处,2处）注入ANA,应用各组ANA桥接10 mm坐骨神经两断端间的缺损,坐骨神经功能指数（Sciatic function index,SFI）和神经电生理检测大鼠运动功能恢复情况;术后28 d麻醉取材。免疫荧光组化染色检测移植ANA中S100和NF表达,Western blot检测ANA中BDNF和Trk B蛋白相对表达。结果1、原代培养SCs 8 d和12d后SCs呈为梭形或三角形胞体,细胞贴壁良好。2、通过S-100和DAPI的双重标记,显示培养SCs显著阳性染色,阳性率为97.5%。3、免疫荧光染色结果:7,8-DHF+SCs组和SCs组ANA中段可见PKH26标记的移植SCs,ANA组未见PKH26标记的SCs,其中7,8-DHF+SCs组PKH26阳性表达显著高于SCs组（P＜0.001）。应用S100免疫荧光标记ANA中髓鞘生成情况,检测结果表明7,8-DHF+SCs组和SCs组ANA中段S100蛋白表达显著高于ANA组,而且7,8-DHF+SCs组S100蛋白表达高于SCs组（P＜0.001）。同时发现7,8-DHF+SCs组和SCs组ANA中段NF蛋白（标记轴突再生）表达显著高于ANA组,而且7,8-DHF+SCs组NF蛋白表达高于SCs组（P＜0.001）。4、Western blot结果显示:与ANA组比较,SCs组和7,8-DHF+SCs组BDNF和Trk B表达显著增高（P＜0.001）,其中7,8-DHF+SCs组BDNF和Trk B表达较SCs显著增高。5、SFI检测结果:术后28 d,与ANA组比较,7,8-DHF+SCs组和SCs组SFI指数显著增高,其中7,8-DHF+SCs组SFI指数高于SCs组（P＜0.001）。6、神经电生理检测结果:SCs组和7,8-DHF+SCs组神经传导速度及波幅较ANA组显著增加（P＜0.05）,而延迟期较ANA组缩短（P＜0.05）,其中7,8-DHF+SCs组神经电生理参数改善优于SCs组。结论7,8-DHF联合SCs对坐骨神经损伤后轴突再生、髓鞘形成和功能恢复的作用优于SCs组,其机制可能与7,8-DHF促进再生神经BDNF及其受体Trk B表达,进而促进移植的SCs存活有关。
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