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目的:研究CD4+CD25+T细胞对特异性抗原敛敏的DC-CIK细胞肿瘤杀伤活性的影响,以探讨DC-CIK细胞、Treg细胞在抗肿瘤免疫中所起的作用以及相互关系,为以CD4+CD25+T细胞为靶点的抗肿瘤免疫治疗的临床应用提供理论基础。
方法:体外诱导分化脐血和成人外周血来源的DC、CIK细胞,将特异性抗原致敏的成熟DC与CIK细胞共同培养,在不同的培养阶段通过免疫磁珠分选去除CD4+CD25+T细胞。倒置显微镜观察细胞形态;胎盼蓝染色检测细胞增殖能力;流式细胞术检测DC、CIK细胞表型及CD4+CD25+T细胞分离纯度;RT-PCR技术检测CD4+CD25+T细胞中Foxp3 mRNA的表达;MTT染色法检测对不同的培养阶段应用免疫磁珠分选去除CD4+CD25+T细胞成分的特异性抗原致敏的DC-CIK细胞对SGC-7901胃癌细胞株的杀伤活性。
结果:经体外诱导分化的脐血和成人外周血特异性抗原致敏的DC-CIK细胞同时得到扩增,培养15天的脐血扩增倍数明显高于成人外周血(P<0.01),但两者在细胞毒方面无显著性差异;培养前、后脐血及成人外周血CD4+CD25+T细胞均表达Foxp3基因,通过免疫磁珠分选去除CD4+CD25+T细胞的脐血DC-CIK细胞明显低表达Foxp3基因(P<0.01);在培养前、后通过免疫磁珠分选法去除CD4+CD25+T细胞特异性抗原致敏的脐血及成人外周血DC-CIK效应细胞组对SGC-7901胃癌细胞株的杀伤作用明显高于未去除CD4+CD25+T细胞组(P<0.05),而培养前、后通过免疫磁珠分选法去除CD4+CD25+T细胞特异性抗原致敏的脐血及成人外周血DC-CIK效应细胞组之间无显著性差异(P>0.05)。
结论:脐血和成人外周血特异性抗原致敏的DC-CIK细胞具有明显的抑瘤作用;培养前、后去除CD4+CD25+T细胞成分的DC-CIK细胞抗肿瘤免疫的作用更加高效而且特异。说明CD4+CD25+T细胞具有抑制特异性抗原致敏的DC-CIK效应细胞杀瘤活性的作用。