基于仿生纳米结构构建新型模拟酶研究

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大自然的生命体历经了亿万年的演化,几乎完善了智能操控的一切过程。向自然学习,是人工智能新材料和新体系发展的永恒主题。天然酶作为生物催化剂,能够巧妙调节有机体的一切生命活动。然而,由于天然酶的蛋白质组成,大大限制了它的实际应用,获得高效稳定的酶模拟物便成为了研究热点。纳米材料以其比表面积大,表面能较高和生物相容性好等特性,近年来已经被广泛应用于模拟酶的构建。本文正是在这一背景下,利用生物化学,纳米化学,界面化学等综合研究方法,设计合成了一系列具有天然类酶活性的纳米材料和体系。推动模拟酶系统具有更好的生物相容性和实际应用价值,也进一步为功能纳米材料的应用奠定了基础。主要内容如下:1)以生物体内广泛存在的转铁蛋白天然外壳为材料基础,利用其中空球形纳米结构空腔为模板,通过点控制技术合成去铁蛋白双金簇纳米粒子(Au-Ft)。经过TEM,紫外可见光谱,荧光光谱表征,其结果与前期工作相符,证明成功制备了该粒子。详细研究了Au-Ft的类过氧化物酶的酶学性质。Au-Ft对温度和pH均存在类似于HRP的依赖关系。Au-Ft的最适反应条件为pH4.0,温度45℃。对比于粒径较大的金粒子,Au-Ft具有突出的类酶活性,并且去铁蛋白外壳对金粒子的酶活性有促进作用。Au-Ft具有较好的pH稳定性,在高温环境下仍然具有部分酶活性。进一步的稳态动力学表明其具有米氏酶特性,并确定其反应机制符合乒乓机制。Au-Ft对底物TMB的Km值低于天然酶,而对底物H2O2的Km值高于天然酶,表现出了不同的底物亲和力。最后,我们将其与GOx偶联,构建了简单快捷的葡萄糖检测法。2)以仿生智能纳米通道为基础,通过离子径迹和化学刻蚀相结合的方法,制备出具有二极管整流性质的非对称单孔材料。通过EDC/NHS修饰法,将具有GPx活性中心的生物活性肽(SRGDU)修饰到单锥纳米孔道内表面。活性中心的Se与底物GSH和tBuOOH的反应能够引起孔道内有效孔径的变化。当酶通道系统与底物GSH,tBuOOH依次作用时,纳米通道的整流强度和电流均呈现先减小后增大的趋势,且对tBuOOH的响应程度随着浓度增加而增大。在对比实验中,裸孔道和修饰对比活性肽的纳米通道则表现出相反的变化。这种模拟酶体系还能够实现多次循环响应。这种仿生智能模拟酶体系为模拟酶的发展提供了新的设计思路。3)本论文还进行了仿生智能孔道在生物毒素检测方面的研究。伏马毒素(fumonisinB1)主要存在于农业中。它不但污染粮食和相关制品,并对家畜产生潜在的致癌性和毒性。我们基于仿生智能孔道材料,设计具有伏马毒素响应性的非对称纳米孔检测体系。通过化学修饰法,将伏马毒素抗体修饰到智能孔道内表面,制备出对伏马毒素具有特异性响应的检测器件。随着对毒素响应浓度的增大,孔道呈现的整流比逐渐减小。未修饰的纳米孔与一系列伏马毒素作用,未呈现出电流和整流比的变化。本研究基于仿生智能纳米材料,探究了伏马毒素检测的新体系,为生物毒素的检测提供了新的思路。综上所述,本论文遵循向自然学习的思路,以天然铁蛋白为模板,制备去铁蛋白双金簇(Au-Ft)纳米粒子,并首次发现Au-Ft的类过氧化物酶活性。进一步探究了其催化反应的条件,性质和反应机制。最后将其应用于葡萄糖生理水平的检测。然后我们在仿生材料的基础上,构建了具有类GPx反应性的模拟酶体系。通过电流和整流比的改变,来评价体系的响应性。同时,我们还将仿生纳米材料用于生物毒素的检测,成功构建了伏马毒素检测的新方法。
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