目的：　　炎症性肠病（IBD）的发病机制尚未完全清楚。最近的研究认为，IBD的发病可能与肠粘膜屏障破坏有关。IBD在治疗方面多采用类固醇激素、免疫抑制剂及5-氨基水杨酸(5-ASA)类药物，但此类药物不良反应较多且疗效不佳。微生态制剂酪酸梭菌在治疗IBD动物实验和人类UC中均取得了良好的疗效，分析其机制可能与益生菌参与肠道粘膜屏障的保护作用有关。　　随着微生物学的发展，应用益生菌(probiotics)治疗或辅助治疗IBD已成为一个新的研究热点。酪酸梭菌属于梭菌属的革兰阳性专性厌氧芽胞杆菌，临床实践证明酪酸梭菌在治疗肠道疾病方面的效果显著，然而其确切的作用机制尚不十分清楚。为明确酪酸梭菌对肠黏膜屏障是否具有保护作用及其机制，本研究应用葡聚糖硫酸钠(DSS)建立IBD动物模型，观察酪酸梭菌对肠上皮细胞紧密连接蛋白（Claudin-1、Claudin-2、occludin和ZO-1）表达的影响，为酪酸梭菌用于IBD的治疗提供理论基础。　　方法：　　1、DSS诱导的结肠炎模型的建立与分组　　50只BALB/c小鼠随机分为正常组、DSS模型组、酪酸梭菌组、5-ASA组、酪酸梭菌联合5-ASA组，每组10只。正常组自由饮水7天，其余四组给予5％DSS自由饮用7天。正常组不予干预，模型组每日给予相应药物灌胃。　　2、疾病活动指数积分(DAI)　　每日称量小鼠体重、观察大便性质和行隐血试验，按Hamamoto等标准进行DAI积分。　　3、组织学损伤积分　　应用HE染色观察小鼠结肠粘膜的改变。按照Dielemen积分标准进行组织学损伤积分。每个切片随机选取5个以上高倍视野(X200)，取平均值作为组织学损伤积分。　　4、肠道细菌培养　　在无菌操作下，分别采取从大鼠肛门挤出的新鲜大便，接种到选择性培养基平板上，需氧菌在37℃培养48h，厌氧菌在37℃培养72h，进行活菌计数(cfu/g)。大肠杆菌，双歧杆菌，乳杆菌，肠球菌的培养分别用EMB，BBL，MRS，ES培养基。　　5、免疫组化法检测紧密连接蛋白Claudin-1、Occludin、Claudin-2和ZO-1的表达　　石蜡包埋块4μm连续切片，应用免疫组化SP法检测Claudin-1、Occludin、Claudin-2和ZO-1的表达，进行显微镜下观察染色的效果，显微镜下(×400)摄片。　　6、Western blot法检测紧密连接蛋白Claudin-1、Occludin、Claudin-2和ZO-1的表达以及炎症因子IL-1β、IL-13、IL-10、TNF-α和NF-κB的表达　　分别取正常组，DSS造模第3天组，DSS造模第7天组，5-ASA组，酪酸梭菌组以及S-ASA联合酪酸梭菌组小鼠中下1/3结肠组织，以Western blot法检测Claudin-1、Occludin、Claudin-2和ZO-1的表达以及炎症因子IL-1β、IL-13、IL-10、TNF-α和NF-κB的表达。　　7、统计学处理　　本实验所有数据用均数±标准差表示，利用SPSS17.0分析软件，采用ANOVE方差分析法中SNK和LSD法进行差异性分析，P＜0.05提示有统计学意义。　　结果：　　1、酪酸梭菌对DSS诱导的结肠炎小鼠疾病活动指数及组织学损伤的影响　　正常组小鼠一般情况良好，疾病活动指数积分(DAI)在零水平左右;其余4组小鼠在造模第3天出现体质量减轻，毛发无光泽，活动减少，精神萎靡，黏液便，部分小鼠大便尖端有脓等，DAI积分开始升高，并在第7天达到最高;给予5-ASA、酪酸梭菌和5-ASA联合酪酸梭菌治疗后，DAI积分从第5天起较DSS组有所改善(P＜0.05)，但各治疗组(5-ASA组、酪酸梭菌组和5-ASA联合酪酸梭菌组)之间无统计学差异。肉眼大体组织学观察显示结肠炎症改变从肛门向上呈连续性发展，黏膜可见散在浅溃疡，多位于左半结肠和直肠。　　光镜下正常组小鼠结肠黏膜完整，腺体排列整齐，隐窝正常，无炎症细胞浸润和杯状细胞减少;DSS组黏膜缺损，上皮缺失，腺体大多数不完整，排列紊乱，隐窝破坏变形，广泛炎症细胞浸润，主要累及黏膜层，杯状细胞明显减少，组织学损伤积分较正常组明显升高，差异有明显统计学意义(P＜0.01);各治疗组（酪酸梭菌组、5-ASA组和酪酸梭菌联合5-ASA组）黏膜缺损较DSS组轻，部分腺体不完整，炎症细胞减少，组织学损伤积分与DSS组相比下降，差异有明显统计学意义(P＜0.01);治疗组中，组织学损伤积分分别为：5-ASA联合酪酸梭菌组高于5-ASA组高于酪酸梭菌组，且差异有统计学意义，(P＜0.05)。　　透射电镜下观察，正常组中紧密连接结构位于肠上皮细胞间顶端，为一致密的发箍样结构，给予DSS造模第3天，即可见紧密连接(TJ)结构模糊，造模7天后TJ出现不同程度的囊状扩张，数目减少，位于TJ下方的缝隙连接增宽，而给予治疗后TJ结构有所恢复，密度增加。　　2、酪酸梭菌对DSS诱导的结肠炎小鼠肠道菌群的影响　　给予5-ASA，酪酸梭菌和5-ASA联合酪酸梭菌治疗后，大肠杆菌、双歧杆菌无明显增加(P＞0.05)，而乳杆菌明显增加(P＜0.01)，肠球菌较DSS组下降(P＜0.01)。提示酪酸梭菌有促进肠道内益生菌生长的作用。　　3、免疫组化法检测酪酸梭菌对紧密连接蛋白Claudin-1、Occludin、Claudin-2和ZO-1表达的影响　　Claudin-1，Claduin-2、occludin和ZO-1均在管腔上皮细胞和隐窝上皮细胞膜及上皮细胞连接处顶端表达，呈栅栏样，组化染色可见棕褐色颗粒沉积。Claudin-1在DSS造模第3天表达下降，在DSS造模第7天与正常组相比棕黄色颗粒明显减少，(P＜0.05);给予5-ASA、酪酸梭菌及5-ASA联合酪酸梭菌治疗后，表达较DSS造模第7天组增加，(P＜0.05)。Claudin-2在正常组中表达较少，给予DSS造模后第3天管腔上皮细胞和隐窝上皮细胞胞膜可见棕黄色颗粒沉积，DSS造模第7天(与正常组相比，P＞0.05)，棕黄色颗粒较正常组明显增多(与正常组相比，P＜0.05)，5-ASA组和酪酸梭菌组Claudin-2的表达较DSS造模第7天组无明显下降(P＞0.05)，但联合用药组蛋白表达下降，且差异有统计学意义(P＜0.05)。Occludin在正常组和造模第3天组均有表达，造模第7天occludin的表达明显减少(P＜0.05)，5-ASA组、酪酸梭菌组和5-ASA联合酪酸梭菌组occludin表达较DSS造模第7天组增加(P＜0.05)，且联合用药组occludin出现异位表达，即在管腔上皮细胞和隐窝上皮细胞胞膜和胞浆中均有表达。ZO-1主要在管腔上皮细胞和隐窝上皮细胞胞膜表达，胞浆中亦有少量表达，给予DSS造模第3天，ZO-1的表达明显下降，至DSS造模第7天ZO-1极少表达(P＜0.01)，5-ASA组、酪酸梭菌组和5-ASA联合酪酸梭菌组表达明显增加(P＜0.05)。　　4、Western blot法检测酪酸梭菌对Claudin-1，Claudin-2，occludin和ZO-1的影响　　Claudin-1在DSS造模第3天表达下降，在DSS造模第7天与正常组相比表达减少，(P＜0.05);给予5-ASA、酪酸梭菌及5-ASA联合酪酸梭菌治疗后，表达较DSS造模第7天组增加，(P＜0.05)。Claudin-2在正常组中表达较少，给予DSS造模后第3天表达增加，DSS造模第7天呈高表达，5-ASA组和酪酸梭菌组蛋白表达较DSS造模第7天组无明显下降，但联合用药组蛋白表达下降，且差异有统计学意义(P＜0.05);Occludin在正常组和造模第3天组均有表达，造模第7天occludin的表达明显减少(P＜0.05)，5-ASA组、酪酸梭菌组和5-ASA联合酪酸梭菌组occludin表达较DSS造模第7天组增加(P＜0.05)。DSS造模第3天，ZO-1的表达下降，至DSS造模第7天ZO-1表达明显下降(P＜0.01)，5-ASA组、酪酸梭菌组和5-ASA联合酪酸梭菌组表达明显增加(P＜0.05)。　　5、酪酸梭菌对DSS诱导的结肠炎小鼠结肠组织中细胞因子IL-1β、IL-10、IL-13和TNF-α以及核转录因子NF-κB表达的影响　　给予DSS第7天，细胞因子IL-1β、IL-13、TNF-α和NF-κB较正常组均明显升高(P＜0.01)，而IL-10则较正常组明显下降(P＜0.01)。给予5-ASA，酪酸梭菌和5-ASA联合酪酸梭菌治疗后，IL-1β、IL-13、TNF-α和NF-κB均较DSS组明显下降(P＜0.01)，而IL-10较DSS组升高(P＜0.05)。　　结论：　　1、酪酸梭菌可以缓解DSS诱导的炎症性肠病小鼠急性期症状，修复结肠黏膜损伤。　　2、酪酸梭菌可能通过增加紧密连接蛋白Claudin-1、occludin和ZO-1的表达，抑制肠道内炎症因子IL-1β、IL-13、TNF-α以及核转录因子NF-κB的表达，促进具有抗炎症作用的细胞因子IL-10的表达，增加肠道内乳杆菌的生长，抑制肠球菌的生长，从而起到调节肠道菌群的作用。　　3、酪酸梭菌联合5-ASA治疗不但可以缓解IBD的症状，还可更好地促进急性期肠黏膜损伤的修复。