鸭肝炎病毒(Duck Hepatitis Virus, DHV)是一种无囊膜的病毒,其结构蛋白与病毒在宿主体内的侵染和复制密切相关。研究已发现DHV-1中结构蛋白VP1基因两端的高度可变不仅是区别与其他小RNA病毒的基础,也是不同类型DHV毒力差异的原因。而结构蛋白VP0相对保守。根据亲缘关系最近的人双埃柯病毒(Human Parechovirus,HPeV)的研究,推测DHV-1结构蛋白VP0上可能存在保守的B细胞表位,即产生中和抗体的抗原表位。利用结构蛋白VP0为包被抗原建立的ELISA方法可以广泛的识别各株DHV-1产生的血清抗体,如果制备成商业化试剂盒,将具有广泛的应用前景。本研究通过分子生物学方法表达了DHV-1结构蛋白VP0,并建立了检测DHV-1血清抗体间接ELISA方法,主要完成以下研究工作。(1)将DHV-1的VP0基因克隆入原核表达载体pGEX-KG,构建原核表达质粒pGEX-KG-VPO,使其在E.coli BL21(DE3)中成功表达。对表达产物进行SDS-PAGE分析,目的蛋白以可溶性和包涵体两种形式存在。分别对其进行纯化,得到了纯化后的蛋白,为下一步的研究奠定了基础。(2)将纯化的重组蛋白作为包被抗原,分别建立了可溶性VP0间接ELISA和包涵体VP0间接ELISA方法,并对ELISA的反应条件进行了摸索。确定可溶性VP0间接ELISA方法的抗原最佳包被浓度为4μg/mL,最佳包被条件为37℃3h,4℃过夜,血清最佳稀释度为1:40,HRP标记的兔抗鸭IgY最佳工作浓度为1:8000,最佳工作时间为40min；包涵体VP0间接ELISA方法的抗原最佳包被浓度为8μg/mL,最佳包被条件为37℃3h,4℃过夜,血清最佳稀释度为1:40,HRP标记的兔抗鸭IgY最佳工作浓度为1:8000,最佳工作时间为40min。两种方法包被的重组蛋白均不与禽流感、鸭瘟、呼肠孤与鸭疫里默氏杆菌病的阳性血清发生交叉反应,表明建立的ELISA方法具有良好的特异性。同时,与病毒间接ELISA方法进行了平行比较,检测了978份血清样品。可溶性VPO-ELISA和病毒-ELISA两种方法的kappa值为0.898,包涵体VP0蛋白-ELISA和病毒-ELISA两种方法的kappa值为0.763。当kappa值为0.6以上时两种方法的一致性相当可靠,所以本研究所建立的重组蛋白VP0间接ELISA方法具有相当的可信度。(3)对湖北省,河南省部分血清样品进行了检测。其中,湖北省的114份血清样品中,病毒-ELISA方法阳性检出率为87%,可溶性VPO-ELISA方法阳性检出率为90%。河南省的60份血清样品中,病毒-ELISA方法阳性检出率为90%,可溶性VPO-ELISA方法阳性检出率为88%。