细梗香草病毒病的病原鉴定

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从2010年起,龙岩农科所率先在国内开展细梗香草品种选育及规范化(GAP)种植研究,初步建立了细梗香草GAP示范基地。在种植过程中发现,细梗香草在生长期间常受到病虫危害,其中病毒病危害尤为严重。据统计,田间的发病率在30%-70%,个别田块高达100%。细梗香草在受病毒病危害后的主要症状为:叶片皱缩不平类似瘤状突起,叶片黄化花叶,叶片变小变窄。受病毒病危害后将极大地降低细梗香草品质及产量,严重制约了细梗香草GAP基地的建设发展。因此,急需开展有关细梗香草病毒病的发生规律、病害基础(病害诊断、病原物鉴定等)及综合防控技术等相关研究。本研究将为防控细梗香草病毒病提供相关理论依据,有助于解决细梗香草种植过程中受病毒病危害的突出问题,保证细梗香草病虫害的防治符合绿色中药材的要求,有利于确保细梗香草GAP基地顺利建设发展,保证细梗香草药材产量、质量稳定可控。本研究通过电镜对粗提纯病毒粒子进行形态学观察,发现侵染龙岩细梗香草的病毒主要有两种粒体形态:800-1600nm的线状病毒和直径为25-30nm的球状病毒。寄主反应测定结果显示,此病毒不能通过汁液摩擦接种侵染苋色藜、普通烟、心叶烟、蚕豆等10种指示植物,但能够在本氏烟、灰藜上产生颜色深浅不一的花叶。提取病毒dsRNA,经电泳结果显示共有3300bp.3000bp和2000bp左右3条明显的dsRNA条带,还有1000bp-2000bp之间若干条微弱条带,经分子生物学鉴定3300bp条带为黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus, CMV) RNA3的一段序列,同时血清学方法也检测到CMV的存在。利用CMV保守序列的RT-PCR扩增方法,测定了细梗香草CMV分离物(CMV-XC)的基因组全序列,CMV-XC RNA1全长3357nt,包含一个ORF(95-3076),编码993个氨基酸的la蛋白。CMV-XC RNA2全长为3046nt,包含两个ORF。其中2a ORF (79-2655)编码858个氨基酸的2a蛋白。2b ORF(2414-2749),编码112个氨基酸的2b蛋白。CMV-XC RNA3全长2212nt,内含两个ORF。其中3a ORF (121-960)编码279个氨基酸的3a蛋白,CP ORF(1256-1912)编码218个氨基酸的CP蛋白。利用能检测出大部分线状病毒的马铃薯Y病毒属、马铃薯X病毒属、烟草花叶病毒属和葱属X病毒属的简并引物对不同症状的样品进行RT-PCR检测,结果显示细梗香草上均不含有以上属病毒。生物学测定结果经检验均为CMV侵染,dsRNA也未显示出线状病毒条带,故线状病毒还不能确认为何种病毒,有待进一步研究。
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