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根据奶牛Hsp72基因中抗原性较好的区域设计一对引物并扩增该片段，将扩增得到的基因克隆到pMD18-T载体上，构建重组质粒后转化E.coli DH5α。利用内切酶EcoRⅠ和HindⅢ酶切pMD-18T/Hsp72重组质粒，将切下的目的片断插入pET-32a-c(+)载体，构建pET-32a-c(+)/Hsp72重组质粒。检测后与Genebank中已发表序列的同源性进行比对，DNA序列的相似度为99.25％，氨基酸序列相似度为100％。
将重组质粒在E.coli BL21中高效表达，并用IPTG诱导转化菌表达目的蛋白。SDS-PAGE鉴定该转化菌表达了37kDa，并用Western-blot分析证明该蛋白为Hsp72重组蛋白。经表达形式分析证明，融合蛋白可溶，利用亲和层析提纯蛋白，免疫家兔产生高水平的特异性IgG，通过免疫前血清与免疫后血清对比，用Western-blot检测抗体具有特异性。这些结果表明:该重组蛋白免疫血清可用作检测Hsp72的特异性抗体。