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目的:Apelin、ELABELA多肽是APJ受体的内源性配体,本课题拟探讨apelin亚型apelin-12、apelin-13、apelin-17、apelin-36及ELABELA对兔血小板聚集的影响,研究Pannexin1(Panx1)半通道蛋白-P2X7途径是否介导apelin-12、apelin-17、apelin-36、ELABELA促血小板聚集作用,自噬途径是否介导apelin-13抑制兔血小板聚集的作用,发现Apelin亚型、ELABELA新生物学作用,为阐明血栓性疾病发生机理提供新的理论依据和药物筛选靶点。方法:1、比浊法测定兔富血小板血浆血小板聚集;2、Western blot检测相关蛋白表达。结果:1、Apelin-12(1*10-7~1.0μM)浓度依赖性促进兔血小板聚集,其达峰浓度是51.5±6.6(%),半数有效浓度(median effective concertration,EC50)为0.03981*10-3μM,达峰时间为36.3±15.6(s),达峰速率为3.9±1.4(%/s);2、Apelin-17(1*10-9~0.01μM)呈浓度依赖性地促进兔血小板聚集,达峰浓度是50.1±4.5(%),半数有效浓度(EC50)为0.0014*10-3μM,26.1±7.1,达峰速率为2.9±0.9(%/s);3、Apelin-36(1*10-7~1.0μM)浓度依赖性地促进兔血小板聚集,达峰浓度是45.8±2.6(%),半数有效浓度(EC50)为0.18*10-3μM,达峰时间为22.9±6.8(s),达峰速率为3.1±0.8(%/s);4、elabela(0.001~1.0μm)浓度依赖性促进兔血小板聚集,其达峰浓度是46.7±0.8(%),半数有效浓度(ec50)为0.028μm,达峰时间为31.7±13.8(s),达峰速率为3.6±1.1(%/s);5、apelin-13(0.001~1.0μm)浓度依赖性抑制adp诱导的兔血小板聚集,半数抑制浓度(ic50)为0.0219μm;而apelin-13对胶原(collagen)、凝血酶(thrombin)和花生四烯酸(aa)诱导的兔血小板聚集没有抑制作用;6、apelin-12促进adp和thrombin诱导血小板聚集,不影响collagen和aa诱导的兔血小板聚集。7、apelin-17对adp、collagen和aa诱导的兔血小板聚集没有促进作用,但促进thrombin诱导的兔血小板聚集。8、apelin-36对adp、collagen、thrombin、aa诱导的兔血小板聚集没有影响。9、elabela促进adp、collagen、aa诱导的兔血小板聚集,对thrombin诱导的兔血小板聚集没有影响10、apj受体阻断剂f13a减弱apelin-12、apelin-17、apelin-36、elabela诱导的兔血小板聚集;f13a减弱apelin-13抑制兔血小板聚集作用;11、pannexin1抑制剂丙磺舒(probenecid,prb)和生胃酮(carbenoxolone,cbx)抑制apelin-12、apelin-17、apelin-36和elabela诱导的兔血小板聚集;12、p2x7抑制剂亮蓝(brilliantblueg,bbg)抑制apelin-12、apelin-17、apelin-36和ELABELA诱导的兔血小板聚集;13、自噬诱导剂雷帕霉素(rapamycin,Rapa)减弱apelin-13对兔血小板聚集的抑制作用,而自噬抑制剂3MA增强apelin-13的抑制作用;同时,rapamycin促进ADP诱导的兔血小板聚集,3MA抑制ADP诱导的兔血小板聚集;14、Apelin-13不能阻断apelin-12、apelin-17、apelin-36单独或组合时诱导的兔血小板聚集。结论:1、Apelin亚型apelin-12、apelin-17、apelin-36及ELABELA促进兔血小板聚集;Apelin-13抑制ADP诱导的兔血小板聚集;2、Pannexin1半通道蛋白-P2X7途径介导apelin-12、apelin-17、apelin-36、ELABELA促兔血小板聚集;自噬途径介导apelin-13抑制ADP诱导的兔血小板聚集。