罗汉果(Siraitia grosvenorii(Swingle)C.Jeffrey)是广西重要的经济作物。罗汉果果实营养价值高,含有丰富的果糖、葡萄糖、蛋白质和多种维生素,其性凉味甘,具有清热解毒、止咳润肺等功效,已广泛应用于医药、饮料和调味品中。罗汉果甜甙甜度高、热量低、无毒,可作为肥胖病人、糖尿病人、高血压病人理想的食品添加剂。目前罗汉果品种退化、混杂严重,需要加强育种研究。原生质体培养育种是改良作物品种的一条可行途径。迄今为止,还没有人开展过罗汉果原生质体培养的研究。我们对多种材料在不同的酶液浓度下进行原生质体的游离,以及糖分、激素的种类及浓度对愈伤组织形成的影响进行探讨。本文以罗汉果室外栽培叶片、试管无菌苗叶片、以及试管无菌苗茎段为材料,深人开展了原生质体游离及培养条件的研究,得出如下结果。罗汉果栽培苗叶片灭菌后剥去下表皮和试管无菌苗茎段切成小段以0。4M甘露醇为酶液渗透稳定剂的适宜浓度范围。在含2%纤维素酶,0.1%果胶酶以及其它成分的酶液中,在28士1℃和黑暗条件下,酶解3-4小时;罗汉果试管无菌苗叶片切成2mm长、1mm宽的细条以0。4M甘露醇为酶液渗透稳定剂的适宜浓度。在含4%纤维素酶,1%果胶酶以及其它成分的酶液中在28士1℃和黑暗条件下,50rpm振荡酶解6-7hr均能分离出大量有活力的原生质体。在酶液中添加150mg/L的抗坏血酸可使原生质体的存活率提高12。5%。实验表明以罗汉果室外栽培叶片为材料的原生质体培养在分裂时间、分裂频率等均优于以试管无菌苗为材料的原生质体培养。由于罗汉果原生质体对NH4+敏感。以去掉NH4NO3的MS基本培养基进行原生质体培养。适宜的培养密度为1×105个/mL。在含有2mg/L 2,4-D、5mg/LBA、1mg/LKT和2%椰汁的培养基中进行培养。采用固-液双层培养在细胞分裂时间、分裂频率都优于液体浅层培养和琼脂糖包埋培养。栽培叶片叶肉原生质体培养在2-3天开始第一次分裂,9-10天出现小细胞团,两星期后可形成愈伤组织。