猪链球菌病是一种严重限制我国养猪业发展的细菌性疾病,随着我国规模化养殖企业的迅猛发展,该病所带来的危害日益凸显,同时该病也是一种重要的人畜共患病。猪链球菌病主要导致猪脑膜炎、关节肿胀、败血症、心内膜炎等,该病的主要病原包括猪链球菌2型和马链球菌兽疫亚种。细菌性疾病的预防和治疗多依赖于抗生素的使用,但是大量使用带来的后果是抗生素残留和耐药菌的产生。为了减少抗生素的使用和用药成本,疫苗的使用就显得尤其重要。基于本实验室前期的的研究成果,本研究的目的是通过对相关数据的深入挖掘,对其中一些可能具有良好免疫反应原性的基因进行克隆表达,在本研究中所表达的两种蛋白Sec＿205和MAP通过Western blot验证均具有良好的免疫反应原性,而小鼠免疫攻毒结果显示这两种蛋白均能保护部分小鼠免受致死剂量C55138毒株的攻击。前期的数据分析推测本研究表达的两种蛋白为细胞表面锚定蛋白,而这一推测通过流式细胞术的结果进行了验证。小鼠分别免疫这两种蛋白后,均产生了比较明显的抗体反应,通过对抗体亚型的检测表明,这两种蛋白免疫小鼠后主要以刺激IgG1抗体的产生为主。被动免疫保护中,两种蛋白的二免血清都能为小鼠提供较好的被动免疫保护,说明抗体介导的免疫保护为小鼠免受致死剂量C55138毒株的攻击发挥了重要的作用。通过荧光定量PCR,发现分离自感染小鼠脾脏的马链球菌兽疫亚种的这两种蛋白的编码基因相较于培养基培养时均出现不同程度的上调表达,表明这两种蛋白可能是马链球菌兽疫亚种的重要毒力因子。细菌粘附抑制实验表明,这两种蛋白在马链球菌兽疫亚种入侵宿主时或许发挥了粘附作用。上述实验表明,本研究中表达的马链球菌兽疫亚种的两种表面抗原均具有良好的免疫反应原性并能够为小鼠提供较好的免疫攻毒保护,这些研究结果进一步加深了对马链球菌兽疫亚种的了解,也为猪链球菌病新型亚单位疫苗的开发奠定了基础。