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目的:本实验旨在观察HCN(hyperpolarization-activated cyclic nucleotide-gated channels,HCN)通道在小鼠海马神经元HT22细胞系氧糖剥夺再灌注(oxygen glucose deprivation/reperfusion,OGD-Rep)所致损伤中的作用及其对自噬的调控,并进一步探究其分子机制。方法:采用离体水平氧糖剥夺再灌注(OGD-Rep)模型模拟在体水平脑缺血再灌注损伤;细胞活力实验和细胞流式检测评价OGD-Rep对HT22细胞的损伤作用及HCN通道的特异性阻断剂ZD7288(4-(N-Ethyl-N-phenylamino)-1,2 dimethyl-6-(methylamino)pyrimidinium chloride,ZD7288)的药理作用;采用慢病毒转染技术特异性沉默HCN2亚基蛋白;采用免疫荧光技术检测:(1)慢病毒对HCN2亚基的特异性沉默,(2)ZD7288对OGD-Rep诱导自噬的调节作用;Western blotting技术检测相关蛋白变化:(1)慢病毒对HCN1和HCN2蛋白的沉默作用;(2)LC3-II、p-m TOR、BECN1和p62等自噬相关蛋白表达;应用自噬溶酶体阻断剂氯喹(chloroquine diphosphate salt,CQ)检测ZD7288对自噬小体降解的影响。结果:在氧糖剥夺再灌注损伤模型下,OGD(6 h)-Rep(12 h)组细胞活力下降至(50.53±1.02)%;ZD7288(10μM)显著缓解氧糖剥夺再灌注损伤诱导细胞活力下降和细胞凋亡;OGD-Rep模型显著上调HCN2亚基表达而对HCN1亚基蛋白表达无影响;慢病毒sh HCN2对HT22细胞系具有较高效率转染及对HCN2通道蛋白具有较好的特异性沉默作用;ZD7288和sh RNA作用效果一致,能显著逆转OGD-Rep诱导LC3 II和ATG5蛋白高表达与p-m TOR和p62蛋白下调;ZD7288和sh-HCN2对OGD-Rep诱导自噬的作用均能被CQ取消。结论:在氧糖剥夺再灌注模型下,HCN通道阻断剂通过阻断HCN2亚基促进自噬小降解从而发挥对HT22细胞系的神经保护作用。