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目的本研究通过对食管癌组织中转移相关蛋白—骨桥蛋白(OPN)以及细胞核因子κB(NF-κB)、IκB-α、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达及OPNmRNA的检测,探讨OPN、NF-κB、IκB-α及MMP-9与食管癌的发生、分化、浸润、转移的关系;并分析OPN、NF-κB、IκB-α及MMP-9四者之间相关性。方法1应用免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)方法检测了45例食管鳞癌组织,21例不典型增生组织,24例正常的食管粘膜上皮组织中OPN、NF-κB、IκB-α、MMP-9蛋白的表达。2应用原位杂交技术(In situ hybridization,ISH)检测了45例食管鳞癌组织,21例不典型增生组织,24例正常的食管粘膜上皮组织中OPNmRNA的表达。3应用流式细胞学技术(Flow cytometry,FCM)对27例食管鳞状细胞癌,10例不典型增生组织和8例正常组织中的OPN蛋白表达进行定量检测。结果1 OPN在食管上皮不同病变中的表达1.1免疫组织化学检测采用免疫组织化学技术对45例食管癌组织、21例不典型增生组织、24例正常组织中OPN蛋白的检测结果显示:OPN蛋白在癌组织中的表达(84.4%)明显高于不典型增生组织(47.6%)和正常组织(12.5%),三者差别有显著意义(P<0.05);OPN蛋白的表达与食管鳞癌患者年龄、性别及肿瘤的分化程度无关(P>0.05);与食管癌的淋巴结转移成正相关(P<0.05),有淋巴结转移的癌组织的OPN蛋白的阳性表达率(96.0%)明显高于无淋巴结转移的癌组织(70.0%);与肿瘤浸润深度成正相关(P<0.05),浸及纤维膜的癌组织的阳性表达(93.1%)明显高于未浸及纤维膜的癌组织(68.8%)。1.2原位杂交技术检测采用原位杂交技术检测45例食管癌组织、21例不典型增生组织、24例正常组织中OPNmRNA的表达发现,OPNmRNA在癌组织中的阳性表达(77.8%)明显高于不典型增生组织(57.1%)和正常组织(8.3%);三者之间差异显著(P<0.05)。OPNmRNA表达与患者年龄、性别及肿瘤的分化程度无关(P>0.05);与食管癌的淋巴结转移成正相关(P<0.05);与肿瘤浸润深度成正相关(P<0.05)。此结果与免疫组化的检测结果相一致。1.3流式细胞术检测应用流式细胞术对27例癌组织,10例不典型增生组织,8例正常组织中OPN蛋白表达量(FI值)检测的结果显示:OPN在癌组织中的表达(1.54±0.18)明显高于不典型增生组织(1.13±0.15)和正常组织(1.00±0.08),三者差别有显著意义(P<0.05);且在有、无淋巴结转移的食管鳞癌组织之间及有无纤维膜浸润的食管癌组织之间的OPN蛋白表达量(FI值)均具有明显差异(P<0.05);但OPN蛋白的表达量(FI值)在高、中、低分化的食管鳞癌组织之间及性别和年龄之间无关性(P>0.05),此结果与免疫组化检测的结果相一致。2 NF-κB蛋白在食管上皮不同病变中的表达采用免疫组织化学技术对45例癌组织、21例不典型增生组织、24例正常组织中NF-κB蛋白的检测结果显示:NF-κB蛋白在癌组织中的表达(80.0%)明显高于不典型增生组织(57.1%)和正常组织(20.8%),三者差别有显著意义(P<0.05)。NF-κB蛋白的表达与淋巴结的转移有关(P<0.05),有淋巴结转移的癌组织的NF-κB蛋白的阳性表达率(96.0%)明显高于无淋巴结转移的癌组织(60.0%);NF-κB蛋白的表达与肿瘤浸润深度成正相关(P<0.05),浸及纤维膜的癌组织的阳性表达(93.1%)明显高于未浸及纤维膜的癌组织(56.3%);但NF-κB蛋白的表达与患者性别、年龄、癌组织的分化程度无关(P>0.05)。3 IκB-α蛋白在食管上皮不同病变中的表达采用免疫组织化学技术45例癌组织、21例不典型增生组织、24例正常组织中IκB-α蛋白的检测结果显示:IκB-α蛋白在癌组织中的表达(80.0%)明显高于不典型增生组织(52.3%)和正常组织(8.3%),,三者差别有显著意义(P<0.05);IκB-α蛋白的表达与食管癌组织的淋巴结的转移有关(P<0.05),有淋巴结转移的癌组织的IκB-α蛋白的阳性表达率(92.0%)明显高于无淋巴结转移的癌组织(65.0%);IκB-α蛋白的表达与肿瘤浸润深度成正相关(P<0.05);但IκB-α蛋白的表达与患者性别、年龄、癌组织的分化程度无关(P>0.05)。4 MMP-9蛋白在食管上皮不同病变中的表达采用免疫组织化学技术对45例癌组织、21例不典型增生组织、24例正常组织中MMP-9蛋白的检测结果显示:MMP-9蛋白在癌组织中的表达(73.3%)明显高于不典型增生组织(71.4%)和正常组织(16.7%),三者差别有显著意义(P<0.05);MMP-9蛋白的表达与食管癌组织的分化程度呈负相关,分化程度越高,MMP-9蛋白的阳性表达率越低(P<0.05);且MMP-9蛋白的表达与淋巴结的转移有关,有淋巴结转移的癌组织的MMP-9蛋白的阳性表达率(88.0%)明显高于无淋巴结转移的癌组织(55.0%),两者差别有显著意义(P<0.05);MMP-9蛋白的表达与肿瘤浸润深度有关,浸及纤维膜的癌组织的阳性表达(86.2%)明显高于未浸及纤维膜的癌组织(50.0%),且两者差别有显著意义(P<0.05);但MMP-9蛋白的表达与患者年龄、性别无关(P>0.05)。5 OPN与NF-κB的相关性分析OPN蛋白的表达与NF-κB蛋白的表达之间成正相关(X2=7.148,P<0.05)。6 OPN与IκB-α的相关性分析OPN蛋白的表达与IκB-α蛋白的表达之间成正相关(X2=11.087,P<0.05)。7 OPN与MMP-9的相关性分析OPN蛋白的表达与MMP-9蛋白的表达之间无明显相关关系(X2=0.015,P>0.05)。8 NF-κB与IκB-α的相关性分析NF-κB蛋白的表达与IκB-α蛋白的表达之间成正相关(X2=29.618,P<0.05)。9 NF-κB与MMP-9的相关性分析NF-κB蛋白的表达与MMP-9蛋白的表达之间成正相关(X2=8.295,P<0.05)。10 IκB-α与MMP-9的相关性分析IκB-α蛋白的表达与MMP-9蛋白的表达之间无明显相关关系(X2=0.117,P>0.05)。结论1 OPN蛋白及OPNmRNA在食管鳞癌组织中的表达明显高于不典型增生组织及正常食管粘膜组织,因而提示OPN可能与食管癌的发生发展有关;免疫组化及原位杂交均证明OPN在有淋巴结转移的原发性食管鳞癌组织中的表达明显高于无淋巴结转移组,提示OPN与食管癌的转移有关;OPN蛋白及其mRNA水平的表达均与肿瘤的浸润深度成正相关,提示OPN与食管癌浸润有关。2在食管癌组织中OPN、NF-κB、IκB-α及MMP-9表达量均高于不典型增生组织和正常的食管粘膜组织,而且四者在食管癌组织中的阳性表达与淋巴结转移及有无纤维膜浸润呈显著正相关。表明在食管癌的发生、发展过程中,提示四者具有协同作用,四者表达水平的增高可能共同促进淋巴结的转移及纤维膜的浸润。3 OPN通过激活NF-κB信号转导通路,从而增强MMP-9的基因转录活性,使其表达上调,导致癌细胞的侵袭转移。4 IκB-α是NF-κB的抑制物,IκB-α被磷酸化降解后又迅速地再合成。在食管癌中NF-κB的表达与IκB-α的表达呈正相关,提示IκB-α可能参与NF-κB活化和失活的循环。