落葵多糖的分离纯化与活性研究

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落葵自古以来就是药食两用植物,能清热、滑肠、凉血、解毒。可治小便短涩、痢疾、斑疹、疔疮、阑尾炎、膀胱炎,外用治骨折、出血、烧、烫伤,妇科止血。现在很多研究也已充分证明了大量植物多糖具有各种活性,而且多糖的免疫疗法已给近代肿瘤、艾滋病治疗及其他疾病治疗开辟了新方向,因此本文对从落葵中提取的活性多糖物质进行了研究。
  本课题将落葵多糖进行了抗肿瘤及对红细胞免疫功能影响的研究,并采用离子交换法分离纯化落葵多糖,分析得出最佳的分离条件。分离完成后,对分离后的各落葵多糖组分进行了其中的糖、蛋白质和糖醛酸含量测定,分子量测定及红外图谱分析,并对其进行了体外抗氧化研究。
  实验结果表明,通过对S180荷瘤小鼠瘤体质量和免疫器官重量的影响,以及红细胞对肿瘤细胞免疫粘附能力和血清中红细胞免疫调节因子活性的影响实验,可以得出,落葵多糖对S180荷瘤小鼠有明显的抑瘤作用,同时能明显提高荷瘤小鼠的胸脾脏指数,并通过提高荷瘤小鼠红细胞CRI花环促进率,降低花环抑制率的途径改善机体的免疫状态,以增强红细胞免疫黏附肿瘤细胞的能力,在高剂量时的花环率可达到18.17%,RBC-C3b受体花环促进率为84.42%,,RBC-C3b受体花环抑制率为31.84%,说明落葵多糖具有一定的抗肿瘤作用,并能使荷瘤小鼠的红细胞免疫功能明显提高。采用乙二胺基乙基纤维素-52离子交换柱对落葵多糖进行了分离,得出的最佳分离条件为:上样量为10ml,样品浓度为10mg/ml,洗脱速度为1.7min/ml,pH7.6Tris-HCl-NaCl缓冲液浓度梯度:0~0.6mol/L各100ml,在最佳条件下洗脱出的落葵多糖在280nm处检测到6个峰,按峰图收集到了6个多糖组分,透析后冷冻干燥,得到前4个峰的纯净的白色絮状样品。前4个干燥样品做紫外分析,证明其均为单一组分。采用苯酚-硫酸法、考马斯亮蓝G-250法、硫酸-咔唑比色法分别测出了分离后落葵多糖各组分中的糖、蛋白质、糖醛酸含量。采用高效凝胶渗透色谱法测定分离后的落葵多糖各组分的分子量,经红外图谱分析,多糖各组分确实是糖类化合物。在体外抗氧化实验中,落葵多糖各组分具有明显的清除O-2·和·OH作用,且对H2O2诱导的红细胞溶血也有一定的抑制作用,说明落葵多糖具有良好的抗氧化活性。
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