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目的恶性肿瘤已成为危害人类健康的严重疾病之一,目前肿瘤的治疗方法包括传统的手术、放疗、化疗以及近年来兴起的基因治疗等。但现在临床使用的不少的治疗肿瘤的化学类药品靶向性不是很明确,这些药物杀死了肿瘤细胞,然而一些正常的细胞也被杀死,于是抗肿瘤药物的探究对象变成了那些高效、低毒的自然界的植物[1-4]。最近几年,人们对癌症的见解以及他们在临床工作中的生活经验总结,得出结论"癌症的形成是慢性病”逐渐被医疗界的人们所接受。"与肿瘤并存”、减轻临床方面症状、提升患者的生活质量的观念逐渐得到了国内外各位专家学者的关注,中医药在治疗癌症方面的优势越来越突出,中医药在治疗癌症方面所取得的成就也逐渐被国际世界认可。中医药在治疗肿瘤方面已经取得了相当大的成就,尤其是开发植物的中草药中提取的抗癌有效果组分。分析各种中医药的化学结构式以及从他们之中提取抗肿瘤有效活性成分是当前研究方向。本研究观察了核桃青皮提取物没食子酸对食管癌细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响,以及对细胞周期和Cyclin D1蛋白表达的影响,从而为进一步开发核桃青皮来源的GA治疗食管癌的中药提取物提供理论根据。方法本实验将食管癌细胞KYSE150培养起来后,利用细胞MTT比色法来检测没食子酸(gallic acid)对食管肿瘤细胞KYSE150的增殖抑制率、划痕实验检测没食子酸(gallic acid)对食管肿瘤细胞KYSE150的迁移能力、transwell侵袭实验检测核桃青皮提取物没食子酸(gallic acid)对食管肿瘤细胞KYSE150的侵袭能力,采用流式细胞仪检测没食子酸对食管癌细胞KYSE150细胞凋亡和细胞周期时相性分布的影响,而且利用Western Blot检测经过没食子酸处理过后的食管肿瘤细胞KYSE150中的Cyclin D1蛋白的表达。结果1.食管肿瘤细胞KYSE150的抑制细胞生长的作用:核桃青皮提取物没食子酸浓度分别为10、20、40、80、120μg/m L时,对KYSE150的抑制率分别为4.15%、19.02%、69.64%、90.51%、93.35%(F=57.48,P<0.05)。2.核桃青皮提取物没食子酸处理24 h后食管肿瘤细胞KYSE150的迁移能力明显下降,随着浓度的增加,迁移率逐渐降低,当GA浓度分别为0、20、40、80μg/m L时,对KYSE150的迁移率分别为77%、51%、17%、7%,食管肿瘤细胞的迁移能力与对照组比较差异具有统计学意义(F=440.49,P<0.01)。3.Transwell小室实验检测GA对KYSE150细胞侵袭能力的影响:结果通过计数穿过膜的细胞来判定,结果显示经GA处理48 h后的细胞侵袭能力明显下降,随着浓度的增加,穿膜细胞数逐渐减少,当GA浓度分别为0、20、40、80μg/m L时,KYSE150细胞穿膜数分别为124.66±5.50、87.33±8.62、51.00±9.53、36.00+9.54,食管肿瘤细胞的侵袭能力与对照组比较差异具有统计学意义(F=74.65,P<0.01)。4.流式细胞仪检测GA对KYSE150细胞周期的影响:随着GA浓度的增加,G0/G1期的细胞比例增加,S期和G2/M期的细胞比例减少。当没食子酸的浓度分别为10μg/m L、20μg/m L、30μg/m L时,G0/G1期的细胞比例分别为33.49%、35.80%、40.48%,呈递增趋势,差异具有统计学意义(P<0.05),S期的细胞数分别为46.60%、45.60%、45.29%,呈递减趋势,差异具有统计学意义(P<0.05),G2/M期亦呈递减趋势。5.细胞凋亡的检测:GA能诱导食管肿瘤细胞的凋亡,并且它的凋亡率随着没食子酸药物浓度的递增而增加,呈明显剂量依懒性。6.Western Blot法测定食管肿瘤细胞KYSE150 Cyclin D1蛋白的表达:对加完核桃青皮提取物没食子酸的食管肿瘤细胞KYSE150进行提蛋白,实验以β-actin蛋白为内参,与空白对照组相比,对结果采用Quantity one图像处理软件进行灰度分析,发现食管肿瘤细胞KYSE150经没食子酸处理后Cyclin D1蛋白显著降低。结论核桃青皮提取物没食子酸能抑制食管肿瘤细胞KYSE150的增殖、迁移和侵袭,并且能够促进细胞凋亡,其机制可能是阻碍了Cyclin D1基因蛋白的表达使得食管癌细胞KYSE150阻滞于G0/G1期。