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植物病毒和类病毒保存是病毒抗原制备、疫苗生产、检疫检验等病毒相关研究和应用的基本要求。本研究以感染马铃薯卷叶病毒(Potato leafroll virus, PLRV)、马铃薯S病毒(Potato virus S, PVS)、马铃薯纺锤形块茎类病毒(Potato spindle tuber viroid, PSTVd)的马铃薯品种‘紫花白’试管苗为材料,通过茎尖超低温保存马铃薯病毒和类病毒。获得主要研究结果如下: 1. 以单一感染PLRV、PVS、PSTVd及复合感染PLRV+PVS的试管苗为材料,利用小滴玻璃化超低温保存茎尖。不同带毒状况的茎尖均能成活、再生植株。 2. 对超低温保存后的再生苗继代培养12周后,用DAS-ELISA和RT-PCR进行带毒状况检测,结果表明,在单感PLRV和复合感染PLRV+PVS的再生试管苗中能检测到PLRV,PLRV的保存率为50%;在单感PVS和复合感染PLRV+PVS的再生试管苗中能检测到PVS,保存率均为100%;在单感PSTVd的再生试管苗中能检测到PSTVd,保存率为100%。保存后的PLRV、PVS和PSTVd均能通过嫁接感染无毒砧木。保存后的PVS和PSTVd能通过摩擦接种到无毒植株上。 3. 对成活细胞在超低温保存后的茎尖中的组织学观察表明,超低温保存后,大部分叶原基细胞受损,成活细胞大多位于茎尖的顶端分生组织、第1-3叶原基以及部分第4叶原基细胞中。免疫化学组织法对病毒在茎尖中的定位表明,PLRV不能侵染顶端分生组织和第1-3片叶原基,能侵染第4及其它叶原基。这样,超低温保存后有部分植株仍然是带毒PLRV的。前人的研究表明,PVS和PSTVd能侵染顶端分生组织和幼嫩的叶原基,因而再生植株的带毒率会明显高于PLRV. 本研究首次利用茎尖超低温保存马铃薯病毒与类病毒,为长期、高效保存病毒和类病毒提供了技术平台。