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目的：通过构建具有生物活性的真核表达质粒pcDNA3-NGF并转染至大鼠骨髓间充质干细胞，观察其表达情况，为进一步动物实验施行基因移植治疗骨折提供理论支持。方法：取大鼠脑组织约50mg, TRNzol-A+法提取总RNA。利用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)从总RNA中扩增NGF全长cDNA片断,经琼脂糖凝胶电泳鉴定后，用琼脂糖凝胶纯化回收试剂盒回收NGF目的基因DNA进行Hindlll和BamHI双酶切，与pcDNA3用T4DNA连接酶连接构建真核表达质粒pcDNA3-NGF。将含有重组质粒的阳性克隆大肠杆菌接种至37°C预温的LB培养基中，37’C震荡培养24h进行细菌扩增，取扩增好的菌液按质粒提取试剂盒说明提取重组质粒，提取成功后对其进行Hindlll、BamHI双酶切鉴定，-20°C保存备用。复苏大鼠骨髓基质干细胞，并将欲转染的细胞分为4组：A组为脂质体Lipofectamine2000包裹的重组质粒转染组；B组为脂质体转染组；C组为脂质体包裹的空质粒转染组；D组为含10%胎牛血清的DMEM(Low Glucose)培养液的阴性对照组。采用脂质体Lipofectamine2000转染方法将含有PCDNA3-NGF的重组质粒转染至大鼠骨髓基质干细胞中，在倒置光学显微镜下对比各组细胞的数量及观察细胞突起的生长情况，转染后72h,利用RT-PCR方法检测各组细胞培养液中NGF基因的mRNA表达情况。结果：1.真核表达质粒pcDNA3-NGF的构建：NGF基因与质粒载体pcDNA3连接后的重组质粒、经双酶切鉴定以及序列检测后证实与NGF序列完全相符。重组质粒PCDNA3-NGF经内切酶Hindlll和BamHI双酶切后，内切酶片段长度与插入基因片段相符约504bp;2.将重组质粒按脂质体Lipofectamine2000操作说明书进行转染，倒置光学显微镜下观察到各组细胞生长情况不同：实验组细胞生长状态良好，而脂质体转染组及空质粒组细胞生长状态较差，大量细胞出现细胞核碎裂，形态混乱，胞膜不明显，空白对照组细胞则无明显改变。3.重组质粒pcDNA3-NGF在Lipofectamine2000介导下转染大鼠BMSCs72h后,RT-PCR检测神经生长因子mRNA，琼脂糖凝胶电泳显示在约504bp处出现阳性条带。结论：1.NGF基因与质粒载体pcDNA3连接后符合NGF基因序列，可以为NGF基因转染治疗骨折的实验研究提供理论支持。2.采用脂质体Lipofectamine2000转染方法能成功的将NGF重组质粒转染至骨髓基质干细胞，经转染后携带NGF质粒的大鼠骨髓基质干细胞仍有增殖、分化能力，并且具有了NGF信息表达能力，这些研究结果，可以为我们下一步应用NGF修饰的BMSCs进行基因移植治疗骨折的动物实验研究提供基础。