论文部分内容阅读
目的:探究釉成熟蛋白在体外诱导钙、磷离子矿化及釉质原位再生的能力。方法:1.釉成熟蛋白的重组和表达:从处于釉质发育期的第三磨牙牙胚中提取牙胚细胞的总RNA,通过反转录、扩增的方式得到人cDNA片段,以cDNA作为模板通过RT-PCR获得釉成熟蛋白全长基因。将釉成熟蛋白全长基因与载体连接以构建pET-28a(+)-AMTN表达载体。将pET-28a(+)-AMTN表达载体转入Rosetta(DE3)大肠杆菌感受态细胞,培养、收集蛋白表达产物,蛋白纯化后得到目的蛋白,并经检测后确认为釉成熟蛋白。2.釉成熟蛋白的自组装:将釉成熟蛋白与Tris-HCL/人工矿化液配制为釉成熟蛋白溶液(浓度为100?μg/ml,PH=7.6)在室温下孵育1分钟、10分钟后透射电镜观察自组装过程。3.釉成熟蛋白体的外矿化能力:使用新鲜的完整离体第三磨牙制备牙片,酸蚀、超声清洗、干燥后涂布釉成熟蛋白溶液,室温孵育后置于刚配置好的人工矿化液中37℃培养7天后取样进行扫描电镜、X线衍射分析观察矿化产物表征。结果:1.成功制备并鉴定了釉成熟蛋白。2.透射电镜观察发现釉成熟蛋白1分钟自组装为纳米小球,10分钟、30分钟时纳米小球首尾连接为串珠状。3.釉成熟蛋白在釉质表层诱导出现一层由针状晶体组合而成、互成角度的晶体束,直径为700nm-3μm。对沉积物进行X线衍射分析,在2θ的衍射峰=25.7°,31.8°,32.2°和32.9°时出现了羟基磷灰石同样特征峰,证实此沉积物为羟基磷灰石晶体。结论:釉成熟蛋白能自组装诱导生成一定长度羟基磷灰石晶体,并能诱导其沿a、b轴生长。