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我们自行制备了大鼠microRNA(miRNA)芯片,该芯片可以检测350个大鼠miRNA的表达。利用该芯片我们检测了产后7～49天大鼠附睾中350个miRNA的时间表达谱,筛选出在附睾发育某些阶段高水平表达的96个miRNA,在此之中又筛选出在7～49天这一时期表达发生显著变化的25个miRNA,我们对其中的miR-200c和miR-335做了进一步研究。
miRNA芯片结果显示,miR-335在大鼠附睾中表达,其表达在产后7～49天呈一种单边下降的趋势。随后,我们运用生物信息学方法预测出一个miR-335的靶基因,RASA1,该基因具有促进细胞增殖和抗细胞凋亡的功能。研究发现,将miR-335在NIH/3T3细胞中过表达,RASA1的表达受到抑制；荧光素酶报告基因实验的结果证明RASA1的确是miR-335的靶基因。研究还发现,RASA1在7～21天的大鼠附睾中表达水平较低,但从第28天至其后,其表达保持在高水平。该结果反映出在产后7～49天大鼠附睾中RASA1的表达和miR-335的表达呈相反的关系。这一结果表明,miR-335在大鼠附睾内能够影响其靶目标RASA1的表达,从而在附睾发育过程中发挥调控作用。
miRNA芯片结果表明,大鼠附睾中miR-200c在产后第7天表达水平最低,然后上升,到第36天其表达达到顶峰,在此之后,其表达水平大幅度下降。我们发现在大鼠附睾发育过程中TCF8的表达和miR-200c的表达呈相反的关系,这不仅为先前的研究提供了进一步的证据,还表明在附睾内miR-200c能够抑制靶目标。TCF8的表达。进一步研究显示,miR-200c在大鼠附睾内能够通过调节TCF8的水平来影响受TCF8调控的E-Cadherin的表达。但是,miR-200c在大鼠附睾中对受TCF8调控的另一个因子Interleukin2的影响却不如对E-Cadherin的那么显著,说明Interleukin2除TCF8外明显还受到其它因子的调控。