小鼠不同发育阶段海马和额叶中人类同源衰老相关基因的表达及变化

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[目的]探讨13个与人类同源的衰老相关基因在不同月龄小鼠海马和额叶中的表达及变化,从中筛选出与脑老化最相关的基因。[方法]随机选取正常4月龄,10月龄,18月龄小鼠各10只,雌雄各半,分别设为幼年组、成年组和老年组。分别取各组小鼠的海马和额叶组织,匀浆后,进行13个基因CalcineurinB、Calmodulin、P35、Gabrb3、MAP1B、MAP2、MAPKK4、RAB6A、RAP2A、Regucalcin、SCN2B、Sortilin、Synapsin2B mRNA的逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR),以β-actin为内对照;扩增产物经琼脂糖凝胶电泳鉴定,凝胶成像仪紫外模式下摄取凝胶图片,用BIO-GEL凝胶分析系统进行电泳条带灰度分析计算各目的基因条带与β-actin灰度值得比值,结果用SPSS11.0中的单因素方差分析(one-way ANOVA)进行统计学处理。各组数据用均数±标准差((?)±S)表示。组间比较采用t检验,以P<0.05为显著性差异。[结果]1.可观察到13个基因在不同月龄小鼠海马中均有表达,但含量有所不同:与4月龄组相比,10月龄组和18月龄组中Calmodulin,MAP1B,MAPKK4,Synapsin2B呈显著的下降趋势,有统计学意义(P<0.05);而Synapsin2B的mRNA表达在18月龄组进一步显著减少(P<0.05),其余三个18月龄组与10月龄组间相比无统计学意义;而CalcineurinB,P35,Gabrb3,MAP2,RAB6A,RAP2A,Regucalcin,SCN2B,Sortilin在被检测的三个时间段表达无统计学差异。2.在不同月龄小鼠额叶中均可观察到13个基因的表达,但亦各有不同:与4月龄组相比,10月龄组和18月龄组中Calmodulin,CalcineurinB,Regucalcin,P35,MAP1B的mRNA表达均显著的下降,有统计学意义(P<0.05);在这些基因中,除了Regucalcin 18月龄组呈继续下调,其余四个基因在18月龄组表达与10月龄组间相比无统计学意义(P>0.05);而Gabrb3,MAP2,MAPKK4,RAB6A,RAP2A,SCN2B,Sortilin,Synapsin2B在各时间段表达无统计学差异(P>0.05)。[结论]1.P35、CalcineurinB、Calmodulin、Gabrb3、MAP1B、MAP2、MAPKK4、RAB6A、RAP2A、Regucalcin、SCN2B、Sortilin、Synapsin2B mRNA这13个基因在4月龄、10月龄、18月龄的小鼠海马和额叶中均有表达,但水平各异。提示这13个基因可能参与维持海马和额叶的生理功能,其表达的维持可能为小鼠海马和额叶发育所必需,但具体的功能各不相同;2.MAP1B、Calmodulin、MAPKK4 mRNA在成年和老年组小鼠海马中的表达明显下调,提示它们可能与小鼠海马的老化有关;3.MAP1B、Calmodulin、P35、CalcineurinB、mRNA在成年和老年组小鼠额叶中的表达明显下调,提示它们与小鼠额叶的老化有关;4.在成年和老年组的小鼠海马和额叶中,均发现二个基因:Calmodulin和MAP1B的一致性下调,说明这两个基因的表达下调可能同时参与了小鼠海马和额叶的老化过程。5.Synapsin2B mRNA在幼年、成年和老年组小鼠海马中的表达呈进行性下调,提示Synapsin2B可能为小鼠海马老化进程中的关键调控基因。6.Regucalcin mRNA在幼年、成年和老年组小鼠额叶中的表达呈进行性下调,提示Regucalcin可能为小鼠额叶老化进程中的关键基因。
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