马传染性贫血病毒(EquineInfectiousAnemiaVirus，EIAV)是逆转录病毒科慢病毒属的成员之一，不仅与人免疫缺陷病毒具有序列同源性，而且与其血清具有交叉反应。马传染性贫血驴白细胞弱毒疫苗是迄今为止唯一研制成功的慢病毒疫苗。在马传染性贫血病毒膜蛋白基因的研究中有助于弄清其抗原变异、持续感染和疫苗免疫机理，为艾滋病疫苗的研究提供借鉴。 以质粒pVRCSV1.0-syn-env为模板，利用PCR技术扩增马传染性贫血病毒表面蛋白基因(gp90)，克隆到原核表达载体pET-28a(+)，并且在大肠杆菌Rosetta菌株中得到了表达。纯化蛋白后免疫大白兔制备了gp90多克隆抗体。经过ELISA检测结果表明多克隆抗体效价达到1:12800。 我们对马传染性贫血病毒膜蛋白基因进行了改造，获得了6个不同N-糖基修饰的突变体。首先以env为模板，经过突变RK236SDN获得了第一个突变体基因M-V3-1。然后以M-V3-1为模板，经过突变N199Q获得了第二个突变体基因M-V3-2。接着以env为模板，经过突变N191S获得了第三个突变体基因M-V4-1。接着以M-V4-1为模板，经过突变N217Q获得了第四个突变体基因M-V4-2。接着以M-V3-1为模板，经过突变N191S、N246K获得了第五个突变体基因M-β-sheet。最后以env为模板，经过突变N199Q、N217Q、N246K获得了第六个突变体基因M-None。将上述6个突变体基因分别克隆到pVRCSV1.0载体中，构建成重组质粒pVRCSV1.0－M-V3-1、pVRCSV1.0-M-V3-2、pVRCSV1.0-M-V4-1、pVRCSV1.0-M-V4-2、pVRCSV1.0-M-β-sheet和pVRCSV1.0-M-None。 将上述构建好的6个重组真核表达质粒转染Hela细胞，经过Westernblot分析发现，6种质粒在Hela细胞中均有表达，为研究突变蛋白诱导中和抗体的效果奠定了基础。