论文部分内容阅读
目的：HPV16的基因突变存在地域差异,本研究拟通过分析宫颈癌组织中HPV16E6和E2基因的突变情况,探讨山东青岛地区宫颈癌组织中HPV16E6和E2基因的主要突变型别及新型别。材料与方法：[1]收集山东青岛地区宫颈癌新鲜组织43例,石蜡包埋标本61例,其中宫颈鳞状上皮细胞癌95例,腺癌6例,腺鳞癌3例。[2]用蛋白酶K法,OMEGA试剂盒分别提取新鲜组织,石蜡标本DNA。[3]以提取的DNA为模板,采用PCR技术,以通用引物筛选出感染高危型HPV的宫颈癌标本,然后用HPV16型特异性引物筛选出HPV16阳性标本[4]以HPV16阳性标本DNA为模板,扩增E6、E2X、E2Y基因全序列。[5]所获基因全序列PCR产物纯化后测序,与德国HPV标准株进行比对分析,寻找HPV16E6和E2的突变位点。结果：[1]山东青岛地区宫颈癌组织中高危型HPV及HPV16感染率分别为93.27%(97／104),69.23%(72／104)。[2]石蜡标本扩增效率不高,在104例宫颈癌组织中37例E6,11例E2X,23例E2Y扩增并测序成功。成功测序的E6中有5例与标准株序列相同,32例存在突变,其中25例突变型别为T178G或T178A(D25E)(67.57%)；E2中23例均存在C3684A(T-K),14例同时存在T3524C、C3684A(T-K)和C3787A(D-E),8例同时存在A2926G、C3159A(T-K)、G3249A(R-Q)、T3384C(I-T)、C3410T(P-S)、C3684A(T-K)以及C3787A(D-E)。结论：[1]山东青岛地区宫颈癌组织中HPV16感染率与世界平均感染水平相近。[2]山东青岛地区宫颈癌组织中HPV16E2和E6基因与德国标准株比较存在多处变异。