植物寄生线虫是植物重要病原之一,严重影响农林业的生产,为了筛选对植物寄生线虫具有高防效作用的植物内生细菌,本研究对实验室保存的81株内生细菌进行杀线虫活性测定并优化杀线虫植物内生细菌的培养基配方,对具高效杀线虫活性的植物内生细菌菌株BCM2发酵液中的杀虫蛋白并进行纯化鉴定。进行了植物内生细菌BCM2、CCM7和SZ5在盆栽番茄苗中的45d定殖动态的研究,并测定了3株内生细菌对根结线虫的防效。结果如下:1、以松材线虫为靶标,测定了实验室保存的81株内生细菌发酵液经121℃的杀线虫活性,其中有9株内生细菌在12h内的杀线虫活性稳定在80%以上;单因素实验中5株内生细菌产杀线虫物质更多的最佳碳源和最佳氮源,结果表明这5株内生细菌产杀线虫物质的最佳碳源是牛肉膏,最佳氮源是酵母膏和蛋白胨;以筛选的最佳氮源和最佳碳源建立正交优化实验,正交优化结果如下:菌株LZS1最适培养基组分为1.5%的酵母膏,0.5%的蛋白胨和1.0%的牛肉膏;菌株LZS3最适培养基组分为1.5%的酵母膏,1.0%的蛋白胨和1.5%的牛肉膏;菌株JL1最适培养基组分为1.0%的酵母膏,1.0%的蛋白胨和1.5%的牛肉膏;菌株BFY4最适培养基组分为1.0%的酵母膏,0.5%的蛋白胨和0.5%的牛肉膏;菌株BCM2最适培养基组分为1.0%的酵母膏1.0%的蛋白胨和1.5%的牛肉膏。使5株内生细菌发酵液的12h杀线虫效果稳定在85%以上。2、采用硫酸铵沉淀法提取杀线虫的蛋白质,确定80%饱和浓度硫酸铵是最佳提取浓度。用2LBCM2发酵液中提取杀线虫粗蛋白0.99g;对提取的杀虫粗蛋白理化性质分析,结果表明BCM2发酵液中杀线虫活性成分是不耐热杀耐耐弱碱的蛋白质。采用SephadexG-75凝胶层析和SDS-PAGE纯化蛋白,并用MALDI-TDF-TOF质谱仪进行蛋白质的氨基酸序列分析,结果获得电泳条带为一条带,经质谱分析与磷酸结合蛋白有100%相似性,共计有376个氨基酸,相对分子质量(Mr)为38.5kD,其等电点(pI)值为7.77。3、采用沾根接种法接种内生细菌,3株内生细菌均能稳定定殖在番茄苗体内并呈“先增后减,再增再减”的一个定殖动态。接种第1d,3株内生细菌的定殖量即达到103cfu/g以上,菌株BCM2和CCM7均在第7d达到最大定殖量,分别为4.48×106cfu/g和2.19×106cfu/g,而SZ5则是在定殖第9d达到最大定殖量为7.44×106cfu/g;在定殖第45d后3株菌仍然有较高的定殖量,都维持在103cfu/g以上。3株内生细菌防治根结线虫研究了预防实验和治疗实验的效果,其中预防实验中设计为提前15d接种内生细菌和接种同时移栽至含线虫卵土中的实验,实验结果表明预防防效优于治疗防效,提前15d接种防效优于种同时移栽的实验,其中内生细菌BCM2、SZ5和CCM7提前接种实验的根结抑制率分别为96.69%、90.26%和76.89%;接种同时移栽至含线虫卵土中实验的根结抑制率分别为78.57%、85.71%和78.77;治疗实验的根结抑制率分别为8.29%、23.38%和3.10%。同时发现3株菌对番茄苗具有一定的促生作用,内生细菌BCM2、SZ5和CCM7的干重增加率分别为53.75%、46.38%和66.67%。