自上世纪初,人们提出利用病毒治疗肿瘤以来,病毒开始广泛地应用于肿瘤治疗。目前腺病毒成为肿瘤基因治疗中研究最多,应用最广泛的病毒载体,原因在于其具有以下特点:宿主范围广泛,可感染处于分裂和非分裂期的细胞,不整合入染色体基因组,无插入致突变性,易操作,易纯化,致病性低且病毒滴度高等。然而腺病毒在肿瘤治疗中也存在一些问题,如靶向性差,某些细胞中感染效率低等。因此,人们开始对腺病毒的结构进行以下改造:特定位点的点突变,某基因片段的缺失突变及在上述两种方法基础上肿瘤治疗基因的插入等。至今,人们对腺病毒的结构和功能有了较深的认识,但是这大多集中在保守区的研究上,如腺病毒早期基因EIA的保守区CR1、CR2和CR3,而对保守区之间的非保守区的结构和功能及其对保守区的影响了解较少。　　 为此本研究对EIA进行缺失突变,并研究突变EIA能否与Rb结合,及该腺病毒突变体对肿瘤细胞生长的影响。将编码腺病毒E1A蛋白111-120位氨基酸残基的核苷酸缺失突变,并在该基因上游插入绿色荧光蛋白报告基因构建增殖型腺病毒载体AdSUEGFP-EIA△111-120。同时利用本实验室构建的野生型腺病毒AdSUEIA和缺失与Rb结合能力的突变腺病毒T100(缺失EIA上125-128位的nt)作为对照。这些腺病毒载体的EIA均受人端粒酶启动子(hTERTp)的调控,可在端粒酶阳性的细胞中表达。荧光显微镜观察结果显示AdSUEGFP-EIA△111-120可在肿瘤细胞内表达所携带的外源基因,免疫共沉淀实验检测到突变E1A具有与Rb结合的能力,病毒增殖实验和流式细胞周期检测结果显示所构建的重组病毒载体AdSUEGFP-EIA△111-120可在肿瘤细胞A549和Caco-2中复制增殖,且该病毒在A549细胞中的增殖能力高于在Caco-2的增殖能力,与对照病毒相比,其还能促进A549细胞更多地进入S期。