纳米银和黄酮相互作用研究及分析应用

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核酸是生命的物质基础。它是基本的遗传物质,并且在蛋白质的生物合成上占重要地位。核酸是由许多核苷酸聚合成的生物大分子化合物,为生命的最基本物质之一,在生长、遗传、变异等一系列重大生命现象中起决定性的作用。因此核酸的定量测定以及小分子药物与核酸相互作用方式研究在临床医学、药学、生命科学等方面都具有重要的意义。黄酮类化合物在植物中广泛存在,迄今为止从天然产物中已经发现了大量的黄酮类化合物,其中大多数化合物具有重要的生理和药理作用。由于黄酮类化合物具有独特的化学结构,因此在荧光分析中得以应用。本论文建立了以黄酮类化合物为荧光探针测定核酸的分析方法,通过紫外吸收光谱、圆二色光谱、透射电镜、荧光显微镜等技术手段,初步探讨了两种黄酮类物质与核酸的相互作用,并将纳米银-黄酮复合纳米探针应用于核酸琼脂糖凝胶电泳分析和细胞成像中。论文第一部分综述了黄酮类化合物的在医学上应用研究进展,以及纳米银在生物大分子中分析应用的研究进展。论文第二部分探讨了电化学还原法制备纳米银的条件,并选择了以PVPK30作为稳定剂所制备的纳米银用于后续荧光分析研究。论文第三部分深入研究了槲皮素-纳米银与核酸之间的相互作用机理,在本章中,利用UV、CD、FP、TEM等技术手段探讨了其相互作用机理:槲皮素主要通过B-C环与核酸结合,槲皮素-核酸复合物作用于纳米银表面,且核酸为槲皮素和纳米银之间提供了适宜距离,促进了纳米银-核酸-槲皮素体系的荧光增强。另外,还将槲皮素-纳米银探针应用于核酸琼脂糖凝胶电泳显色分析和细胞荧光成像中,得到了满意结果。论文的第四部分研究了有无纳米银存在的条件下,杨梅素-核酸体系的荧光增强特性,并对杨梅素、纳米银和核酸之间的相互作用机理进行了探讨。研究发现,核酸可以增强杨梅素的荧光,且纳米银的存在可以进一步增强体系的荧光。在最佳实验条件下,体系的荧光强度的增强程度与核酸的浓度在一定范围内具有良好的线性关系。结果表明:鱼精子DNA (fsDNA)、鲑鱼精了DNA (smDNA)、小牛胸腺DNA(ctDNA)和酵母RNA (yRNA)的线性范围分别是9.0×10-9-1.2×10-6g/mL,9.0×10-9-1.0×10-6g/mL,1.0×10-8-1.0×10-6g/mL和9.0×10-9-1.0×10-6g/mL,它们的检出限分别为3.1×10-9g/mL,6.8×10-9g/mL、8.3×10-9g/mL和7.0×10-9g/mL,可见该方法有较高的灵敏度和较宽的线性范围。并将其用于实际样品的测定,得到满意结果。机理研究表明,杨梅素与核酸形成复合物作用于纳米银表而,在线自组装形成了发光的立方形状的纳米晶。且纳米银能有效的提高杨梅素-核酸体系的光稳定性。本论文的特点:[1]利用电化学还原方法制备了纳米银,研究了多种稳定剂对纳米银性质的影响,并从中选择PVPK30作为稳定剂的纳米银用于分析检测。[2]在前期研究基础上,深入探讨了槲皮素、纳米银和核酸的相互作用机理:槲皮素主要以沟槽或静电方式与核酸的结合,槲皮素-核酸复合物作用于纳米银表面,且核酸为槲皮素-纳米银提供了适宜的距离,促进了纳米银-核酸-槲皮素体系的荧光增强。并将槲皮素-纳米银复合纳米探针用于在核酸琼脂糖凝胶电泳分析和拟南芥原生质体细胞成像中[3]研究了有无纳米银存在条件下杨梅素-核酸体系的荧光特性,建立了测定核酸的新方法,结果表明:纳米银的加入可以有效的增加体系的光稳定性,并在线获得了发光的立方形状的纳米晶。
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