肺癌是最常见的恶性肿瘤之一,并且其发病率逐年递增,其中大约85%-90%的肺癌病例被诊断为非小细胞肺癌。非小细胞肺癌主要分为肺腺癌、鳞状细胞癌和大细胞癌等,其中最常见的是肺腺癌。非小细胞肺癌患者的5年生存率很低,根据肿瘤发生的部位和分期的不同,患者生存率在4%-17%之间。因此,探索新的生物标记(癌基因/抑癌基因)对非小细胞肺癌的预防、诊断和治疗起到重要的作用。Wnt信号通路与癌细胞的增殖、侵袭相关。Wnt信号通路中,Wnt蛋白与Frizzled(Fz)家族受体相互结合,包括脂蛋白受体相关蛋白LRP5/6,从而抑制GSK3复合物的活性,促使了β-catenin在细胞浆中的积聚,并进入细胞核,之后通过与TCF/LEF转录因子结合,诱导Wnt通路靶基因的激活。TRIP13是ATPase家族蛋白的成员,是最早在小鼠中发现的一种有丝分裂检查点相关蛋白。大量研究证实,TRIP13可以调控有丝分裂检查点相关蛋白并且对前列腺癌、结肠直肠癌、上皮性卵巢癌等肿瘤的发生发展相关。我们的研究发现TRIP13在肺鳞癌及肺腺癌中均高表达,且TRIP13的表达水平与肺癌患者的预后相关。体外实验结果显示,TRIP13可以影响肺腺癌细胞的增殖和侵袭能力。TRIP13可以与Wnt通路受体LRP6相互作用并激活Wnt信号通路和上皮间质转化(epithelial-to-mesenchymal transition,EMT)。因此,在早期肺癌的生化检测中,TRIP13可作为良好的预测指标。目的:分析TRIP13在肺癌组织中的表达情况,以及与临床病理因素和患者预后之间的关系;探讨TRIP13在肺癌中的作用及其参与的信号通路分子机制。研究方法:通过基于肿瘤基因组图谱(TCGA)的UALCAN等数据库综合分析TRIP13在肺鳞癌及肺腺癌组织中的表达情况,使用Kaplan-Meier曲线分析TRIP13与患者预后及临床病理因素之间的关系;收集在中国医科大学附属第一医院进行手术切除的16对肺癌组织及其相应的癌旁正常组织新鲜标本,切除后放进-80℃冰箱保存。使用Western blot方法检测肺癌组织以及肺癌细胞系中TRIP13的表达情况;使用免疫荧光检测肺癌细胞系中TRIP13的定位情况;分别在A549细胞以及H1299细胞中转染TRIP13质粒提高其表达量,以及转染TRIP13的小干扰RNA(SiRNA)降低其表达量;通过细胞增殖实验、克隆形成实验以及基质胶侵袭实验研究TRIP13对非小细胞肺癌细胞增殖和侵袭的影响;通过Western blot方法检测在肺癌细胞中过表达以及干扰TRIP13对Wnt信号通路蛋白以及EMT相关蛋白的影响;使用蛋白质免疫共沉淀探讨了TRIP13和LRP6之间的关系,并使用免疫荧光进行定位检测。结果:1、TRIP13在肺鳞癌及肺腺癌组织中的表达水平高于正常肺组织,且与肺癌患者的不良预后相关。肺癌细胞系中TRIP13的表达高于正常支气管上皮细胞HBE且定位于细胞质中。2、在H1299及A549细胞系中过表达TRIP13,可显著促进肺癌细胞的增殖能力,集落形成能力和侵袭能力。而干扰TRIP13后,则抑制了肺癌细胞的增殖能力,集落形成能力和侵袭能力。3、在H1299及A549细胞系中过表达TRIP13可以显著降低GSK3β的表达水平,增加LRP6、activeβ-catenin、TCF4、LEF1和Wnt信号通路靶蛋白c-Myc,MMP7和Cyclin D1的表达水平。在H1299及A549细胞中干扰TRIP13可以增加GSK3β的表达水平,降低LRP6、activeβ-catenin、TCF4、LEF1和Wnt信号通路靶蛋白c-Myc,MMP7和Cyclin D1的表达水平。4、在H1299及A549细胞系中过表达TRIP13可以降低E-cadherin的表达水平,增加N-cadherin、Snail和Vimentin的表达水平。在H1299及A549细胞系中干扰TRIP13可以增加E-cadherin的表达水平,降低N-cadherin、Snail和Vimentin的表达水平。5、双向内源性免疫共沉淀证实TRIP13可与LRP6相互结合。通过激光共聚焦免疫荧光实验证实了LRP6和TRIP13可在肺癌细胞中共定位。结论:1、TRIP13在肺癌组织中高表达,并与肺癌患者的不良预后相关;2、TRIP13可通过活化Wnt信号通路和EMT促进肺癌细胞的增殖和侵袭能力;3、TRIP13可能通过与LRP6结合,发挥促进Wnt信号通路活性的作用。