【摘 要】
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该试验选取生长发育正常、健康状况良好的20日龄雄性SD大鼠作为研究对象,无菌取其腹股沟部、附睾部、肾脏周围脂肪组织,结合该实验室具体情况,采用胶原酶消化法进行原代培养,
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该试验选取生长发育正常、健康状况良好的20日龄雄性SD大鼠作为研究对象,无菌取其腹股沟部、附睾部、肾脏周围脂肪组织,结合该实验室具体情况,采用胶原酶消化法进行原代培养,并添加不同浓度的肿瘤坏死因子(TNF-α)处理,通过细胞形态学动态观察、细胞计数、常规染色、MTT比色以及油红O染色提取法等方法,探讨了TNF-α在脂肪细胞增殖与分化中的作用,旨在为畜禽体脂沉积调控和人类肥胖症研究提供实验依据.通过试验,摸索出了适合该实验室的大鼠前体脂肪细胞离体培养条件.比较了组织块法和消化法两种培养方法的优缺点,消化法比组织块法更适合用于大鼠前体脂肪细胞增殖与分化的研究,消化法细胞提纯程度高,更易贴壁,生长迅速,获得的脂肪细胞数多,且所含脂滴多,此法的不足之处是需要大量I型胶原酶,实验费用高.而组织块法培养需要时间长,各细胞成分混杂.消化法的适宜接种密度为4×10<4>、5×10<4>、6×10<4>个细胞/cm<2>,其中最适密度为5×10<4>个细胞/cm<2>.通过生长曲线绘制、倍增时间测定和MTT比色研究了TNF-α对原代培养的大鼠前体脂肪细胞增殖的影响.通过HE染色、Giemsa染色、油红O染色以及油红O染色提取法研究TNF-α对原代培养的大鼠前体脂肪细胞分化的影响.结果表明,TNF-α通过抑制前体脂肪细胞脂滴的增多和融合,从而抑制分化.其中以10ng/ml TNF-α的处理组对细胞分化的抑制作用最显著.
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