肾脏近曲小管钾离子通道在维持细胞膜电位、调节细胞体积以及维持水与电解质的重吸收和分泌等方面，均起着非常关键的作用，而且近曲小管是缺氧和中毒损伤最易发生的部位，因此，对肾脏近曲小管钾离子通道的研究具有较重要的生理学意义，目前尚未完全了解其生理学特性和功能。 环孢素A是临床器官移植中广泛使用的免疫抑制剂，但其严重的肾毒性限制了它的使用。其发病机制尚未完全明了，目前研究发现它不仅可引起血液动力学的改变，而且对肾小管有直接的损害作用，且与近曲小管密切相关。但对于近曲小管离子通道的改变研究涉及甚少。为此，本实验建立正常小鼠肾脏近曲小管上皮细胞原代培养体系，采用细胞贴附式、内面向外式膜片钳技术研究正常小鼠肾脏近曲小管上皮细胞顶侧膜K+通道的电生理学特性，观察免疫抑制剂环孢素A对K+通道特性的影响，探讨其可能的作用机制。 方法： 采取改良的胶原酶消化-密度梯度离心法进行小鼠肾脏近曲小管上皮细胞的分离及纯化，获得的近曲小管上皮细胞在DMEM培养基中进行单层培养。通过台盼蓝排斥法鉴定细胞活性；光镜、碱性磷酸酶染色观察细胞形态学改变；透射电镜观察其超微结构。 在原代培养的细胞和经环孢素A预处理(终浓度300ng/m1)的培养细胞上采用细胞贴附式、内面向外式膜片钳技术记录近曲小管顶侧膜K+通道电流进行分析比较。 主要结果： 1.采用改良的胶原酶消化-密度梯度离心法获得的细胞大小一致，活性＞95％；光镜下可见未贴壁细胞为圆形，胞体光滑，折光性好，直径约8.5～10.5μm；贴壁细胞呈梭形，透明度增大而折光性减弱，融合的单层细胞呈鹅卵石样铺满瓶底；碱性磷酸酶染色呈阳性；电镜检查见面向液层的刷状缘有微绒毛形成，细胞内可见丰富的线粒体、溶酶体。 2.小鼠肾近曲小管上皮细胞顶侧膜上的这种K+通道在多数膜片(61％)中自发性开放，无自发性开放的通道在牵张时可被激活。使用含有TTX、Cd2+的浴液S2灌流时仍能记录到这种通道。该通道表现为单一的电流幅度，在超极化状态下表现为内向电流，其斜率电导为25.5±0.4pS(钳制电压在20mV～60mV，n=8)，通道开放活动随极化程度的增大而增加。在去极化状态下表现为外向电流，并具有内向整流特性，其外向电流的弦电导为9.25±0.6pS(钳制电压在-40mV到-60mV,n=6)；在对称性钾浴液中该通道的翻转电位是4.2±1.3mV，内面向外式两侧不对称溶液(70mMbath/140mMpipette)时翻转电位在-15.1±3.5mV，Pk/PNa≈8∶1；该通道具有一个开放时间常数和两个关闭时间常数；开放概率与钳制电压依赖性不明显；通道的活动受细胞外液pH值的影响，随着细胞外液酸性增加(pH7.4～6.8)开放概率减小。 3.经CsA处理后记录到的K+通道电流幅度较之相同钳制电压下的正常通道差异不明显，其通道的Ⅰ-Ⅴ关系并没有因CsA处理的作用而发生位移或改变，但开放概率明显降低，且差异显著。 结论： 1.采用改良的胶原酶消化-密度梯度离心法分离的细胞建立的原代培养方法纯化度高，性质可靠。 2.小鼠肾脏近曲小管上皮细胞顶侧膜上存在一类低电导的内向整流K+通道，其分布广泛，可能参与钾离子转运、调节细胞体积及维持电势能的稳定。 3.CsA对近曲小管上皮细胞K+通道的影响主要在于对通道开放概率的抑制，可以推测CsA可能是通过影响顶侧膜的细胞旁通路使近曲小管对K+重吸收增加(也不排除由于细胞的直接毒性的影响)，这种作用可以用于解释尿钾排泄的降低及临床上高钾血症的出现。