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烟草丛顶病(Tobacco bushy top disease,TBTD)是一种毁灭性很大的烟草病害,在我国云南省多个烟区流行并造成了严重的经济损失。烟草丛顶病也是我国目前发现的仅此一例由黄症病毒科(Luteoviridae)和幽影病毒属(Umbravirus)病毒复合侵染引起的病害,并且是植物病毒病害。该病害的病毒复合体成分复杂,包含了 5种RNA成分,除了一个尚未定性的病毒RNA之外,其他4种分别是烟草脉扭病毒(Tobacco vein distorting virus,TVDV)、烟草丛顶病毒(Tobacco bushy top virus,TBTV)这两者为主要致病病毒,以及烟草丛顶病毒卫星RNA(Tobacco bushy top virus satellite RNA,TBTV SatRNA)和烟草脉扭病毒伴随 RNA(Tobacco vein distorting virus associate RNA,TVDVaRNA)。为了研究该病害病原病毒复合体各组分的传播特性,增加对该植物病毒的各个RNA组分相互作用关系的进一步理解,本文从以下几方面进行了深入的研究:首次明确了 TVDV、TBTV、TBTVSatRNA和TVDVaRNA三者之间的相互作用关系。通过已构建的TVDV、TBTV、TBTV SatRNA和TVDVaRNA农杆菌介导的病毒侵染性克隆对其相互作用关系进行了深入研究。被单独接种TVDV的植株没有表现出明显症状,但TVDV可以单独进行复制并系统感染,还可以通过蚜虫进行传播;同时接种TVDV和TBTV SatRNA的植株也没有明显症状,并且检测不到TBTVSatRNA,TBTVSatRNA单独无法进行复制和系统感染,并且不能通过蚜虫进行传播;同时接种TVDV及TBTV的植株症状轻微,两者RNA可以复制和系统感染,通过蚜虫可以从本氏烟传播到烤烟上;同时接种TVDV、TBTV和TBTVSatRNA,植株黄化症状较重,侧枝较多,但仍比接种已知4种的植株症状轻,三种病毒RNA均可以复制和系统感染,并且均可以通过蚜虫传播。但TVDV与TBTV共同侵染的烤烟,在通过蚜虫传向其他烤烟时,并未成功,而卫星RNA存在时三者都可以传到其他烤烟上。为了获得烟草丛顶病病原病毒复合体中尚未定性的病毒RNA序列,我们建立了一种应用基于转录组深度测序技术的针对植物病毒鉴定的方法。通过提纯烟草丛顶病病原病毒粒子,利用深度测序的技术对其中的病毒总RNA的成分进行了研究。在深度测序获得序列的基础上,应用生物信息学对测序得到的序列进行注释筛选,提取候选序列,应用RT-PCR技术对候选序列进行验证。在样品中获得了多个新的呼肠孤病毒科(Reoviridae)病毒的RNA序列片段,并在部分烟草丛顶病侵染的植株内检测到上述序列,同时对上述病毒的来源进行了探讨。本次研究帮助我们加深对烟草丛顶病的病原病毒复合体的了解认识,也加深了对植物病毒相互作用机制及传播特性的理解,为防治和研究黄症病毒/幽影病毒复合体引起植物病害提供思路。