论文部分内容阅读
第一部分高糖、高脂影响单核/巨噬细胞细胞因子,miRNAs的表达目的:筛查高糖、高脂影响下人单核/巨噬细胞差异表达的细胞因子和miRNAs。方法:应用细胞因子抗体芯片筛查细胞因子的表达谱,并以ELISA及Western blotting验证芯片结果。应用miRNA芯片筛查高糖、高脂影响下单核/巨噬细胞miRNA的表达谱,以realtime-PCR验证芯片结果。结果:高糖高脂干预下我们观察到108个细胞因子的差异表达,通过ELISA验证高糖高脂上调IL-12p40,western blotting验证OPG,表达上调。realtime-PCR验证miR-128a,miR-145表达下调。结论:高糖、高脂可以影响人单核/巨噬细胞细胞因子,miRNAs的差异表达第二部分miR-145靶向调控骨保护素目的:明确miRNA调控巨噬细胞细胞因子的表达。方法:病人血清OPG水平用ELISA测定,miRNA相对表达量用realtime PCR检测。miR-145抑制剂或前体用电穿孔或脂质体方法转染。转染后OPG的表达变化用western blotting或免疫荧光测定。miR-145与OPG3’UTR的相作用以萤光素酶报告载体分析。结果:血清OPG水平与外周血单个核细胞miR-145的表达呈负相关。western blotting和免疫荧光证实miR-145被抑制后,OPG表达上调,相反,过表达miR-145下调OPG。miR-145直接调控OPG3’UTR。结论:miR-145靶向调控骨保护素的表达。第三部分miR-145调控细胞增殖,凋亡及染色体分离目的:研究miR-145对细胞增殖、凋亡及染色体分离的作用。方法:细胞增殖用XTT及生长曲线评价。miR-145对细胞凋亡的影响用western blotting及TUNEL试验分析。过表达miR-145后染色体分离的情况用免疫荧光研究。结果:抑制miR-145后细胞增殖增加,凋亡受抑制。过表达miR-145通过不依赖p53的途径促进细胞凋亡,并导至广泛的染色体错误分离。结论:miR-145调控细胞增殖,凋亡及染色体分离