一个新的血影蛋白超家族成员(8B7)的结构与功能分析

来源 :中国协和医科大学 北京协和医学院 中国医学科学院 清华大学医学部 | 被引量 : 0次 | 上传用户:nnnnnnnxxxxx
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8B7cDNA(GenBank登记号AF043290)是本实验室克隆的。其编码蛋白质分子中有血影蛋白重复序列,因此是血影蛋白蛋白超家族的一个新成员。我们称此蛋白质为8B7血影蛋白。生物信息学分析显示,此cDNA的核苷酸序列与定位于核膜的血影蛋白超家族成员Enaptin、Nesprin-1、Myne-1、Syne-1等的cDNA的3端1835bp核苷酸序列100%同源。它们均位于人第6号染色体长臂2区5带,是同一个基因通过mRNA变位剪接产生的。Enaptin、Nesprin-1、Myne-1及Syne-1蛋白质的分子中有多个核定位信号序列(NLS),而8B7血影蛋白分子中则缺失了这些核定位信号序列。这样,就产生8B7血影蛋白的亚细胞定位问题。我首先作了8B7血影蛋白在COS-7细胞中的亚细胞定位,观察到它在核膜也有定位。我对8B7血影蛋白分子的氨基酸序列作了进一步分析,见其C-端的跨膜螺旋结构附近有与果蝇的Klarsicht蛋白高度同源的一段氨基酸序列。这段保守的蛋白序列被称为Klarsicht样结构域/KLS结构域/KASH结构域。它与核膜定位也相关。为证明是这个结构域决定了8B7血影蛋白在核膜的定位,我构建了插入有全长8B7cDNA、切除了Klarsicht样结构域的8B7cDNA、或切除了3端核苷酸序列但保留了Klarsicht样结构域的8B7cDNA的重组定位载体,转入COS-7细胞后观察到切除了Klarsicht样结构域后,cDNA编码的蛋白质在核膜上无表达,而保留Klarsicht样结构域者均在核膜有表达。这就证明了是Klarsicht样结构域决定了8B7血影蛋白在核膜的表达。 血影蛋白重复序列多存在于结构蛋白中,在结构上具有蛋白质与蛋白质相互作用的潜在位点,在功能上常作为骨架蛋白组装的结构平台。8B7血影蛋白也必然与其它蛋白质相互作用,发挥其生物学作用。我采用酵母双杂交技术寻找与8B7血影蛋白相互作用的蛋白质,得到了52个阳性蛋白克隆。有待深入研究它们与8B7血影蛋白的关系。
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