【摘 要】
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随着人们对海洋生物活性资源的研究和利用的逐渐加深,研究人员发现由琼胶酶降解得到的琼胶寡糖和新琼胶寡糖在诱导细胞凋亡、抗氧化、抗肿瘤、抗炎、抗龋齿、促进双歧杆菌生长、预防糖尿病等方面具有显著的生理活性功能,可广泛应用于食品产业、化工产业、饲料产业、化妆品产业和医药产业等领域。但目前琼胶酶的来源少、活性低、价格十分昂贵,使琼胶寡糖的市场应用受到的很大限制。本研究旨在筛选具有高效降解琼胶的微生物,提供从
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随着人们对海洋生物活性资源的研究和利用的逐渐加深,研究人员发现由琼胶酶降解得到的琼胶寡糖和新琼胶寡糖在诱导细胞凋亡、抗氧化、抗肿瘤、抗炎、抗龋齿、促进双歧杆菌生长、预防糖尿病等方面具有显著的生理活性功能,可广泛应用于食品产业、化工产业、饲料产业、化妆品产业和医药产业等领域。但目前琼胶酶的来源少、活性低、价格十分昂贵,使琼胶寡糖的市场应用受到的很大限制。本研究旨在筛选具有高效降解琼胶的微生物,提供从海洋贝类肠道中分离、筛选高产琼胶酶微生物的基础方法,并为生产海藻低聚糖提供理论依据和技术支撑。以琼胶为唯一碳源,从海洋贝类肠道微生物共筛选出44株降解琼胶的海洋细菌,通过鲁戈氏碘液染色法和DNS法测定酶活得到一株产酶最高的菌株A-001,酶活力可达到13.01 U·mL-1。菌落形态为乳白色,革兰氏阴性菌,呈弯曲短杆状,通过电镜观察,细菌A-001具有鞭毛。根据生理生化实验和16SrDNA序列鉴定判断菌株A-001为溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)。通过单因素实验和响应面实验相结合的方法对筛选得到的高产琼胶酶菌株进行了培养基的优化,培养基的最优组成:琼脂粉40 g·L-1,氯化钠30 g·L-1,蛋白胨5g·L-1,酵母浸膏10g·L-1,七水硫酸铁0.1 g·L-1,去离子水1L。在最优发酵培养液中培养32h,上清液的酶活达到15.645 比未优化前发酵培养基上清液的酶活为13.01 U·mL-1,比优化前提高了 1.2倍。用最优培养基进行单因素发酵条件优化,结果表明:最优产酶发酵条件:培养基初始pH7.0,接种量11%,装液量30mL,培养温度36℃,转速150 r·min-1,发酵时间42h。在最优发酵产酶条件下,菌株A-001产生的琼胶降解酶酶活性可达到18.09 U·mL-1,是发酵条件优化前的1.39倍。
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