【摘 要】
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第一部分大鼠IL-2shRNA表达质粒的构建与鉴定目的:构建针对大鼠活化T细胞白介素-2基因编码区的短发夹型RNA(shRNA)表达质粒p IL-2,观察其对大鼠活化T淋巴细胞IL-2表达的抑制
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第一部分大鼠IL-2shRNA表达质粒的构建与鉴定目的:构建针对大鼠活化T细胞白介素-2基因编码区的短发夹型RNA(shRNA)表达质粒p IL-2,观察其对大鼠活化T淋巴细胞IL-2表达的抑制效果,并筛选最佳shRNA序列。方法:根据RNA干扰(RNAi)作用原理设计针对大鼠T淋巴细胞IL-2的shRNA,利用pGenesil-2质粒,构建重组干扰质粒p IL-2 A、p IL-2 B及其阴性对照质粒p IL-2C,并经酶切及测序鉴定,用脂质体Lipofectamine转染大鼠T淋巴细胞,RT-PCR检测其对T细胞IL-2基因表达的抑制作用,并筛选最佳shRNA干扰序列。结果:经酶切反应及测序证实重组干扰质粒p IL-2 A、p IL-2 B及其阴性对照质粒p IL-2C构建成功;其中p IL-2 B对活化T细胞IL-2基因的表达有较好的抑制效果,RNA水平抑制率为82%。结论:大鼠shRNA具有明显和特异性的抑制活化T细胞IL-2基因的表达作用。
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