【目的】新生儿癫痫是一种危害严重的疾病,其治疗与发病机制密切相关,但不同部位起源的癫痫其发病机制并不相同。本研究通过离体多电极技术分析新生小鼠离体海马脑片上癫痫样放电的起源及传播模式;使用药理学实验和蛋白质印迹技术分析海马脑片不同部位癫痫样放电的发生机制;探索传统的抗癫痫药物苯巴比妥钠(phenobarbital sodium,PB),PB联合钠钾二氯离子共转运体1(Na~+-K~+-2Cl~-cotransporter 1,NKCC1)阻断剂布美他尼(bumetanide,BMT)对不同部位癫痫样放电的作用,从而寻找新生儿癫痫治疗的有效途径。【方法】第一部分:利用多电极阵列(multi-electrode array,MEA)记录低镁人工脑脊液(artificial cerebrospinal fluid,ACSF)诱导新生小鼠离体海马脑片产生的癫痫样放电。分析癫痫样放电的时空动态特征及参数(频率、幅度、持续时间)特征。第二部分:(1)在低镁模型中,观察10μM BMT,10μMγ-氨基丁酸A型受体(gamma-aminobutyric acid A receptor,GABA_AR)阻断剂荷包牡丹碱(bicuculline,BIC)对海马本部和下托癫痫样放电的作用。(2)在高钾模型中,观察50μM N-甲基-D-天冬氨酸受体(N-methyl-D-aspartate receptor,NMDAR)拮抗剂D-2-氨基-5-磷酸戊酸(D-(-)-2-Amino-5-phosphonopentanoic acid,D-AP5)对海马本部和下托癫痫样放电的作用。(3)利用蛋白质印迹(Western blotting)技术检测新生小鼠海马本部和下托NKCC1,NMDAR亚单位NR2A/B的表达。第三部分:在低镁模型中,观察分析100μM PB及其联合10μM BMT对海马本部和下托癫痫样放电的影响。【结果】第一部分:(1)低镁ACSF灌流后,可在海马脑片上记录到发作间期样放电(interictal-like discharges,IIDs)和发作期样放电(ictal-like discharges,IDs)。(2)IIDs/IDs分为起源于CA3(CA3-origin)和起源于下托(Sub-origin)的IIDs/IDs,CA3-origin IIDs/IDs起源于CA3a/b,并呈双向传播,逆向传播至CA3c、DG,顺向传播至CA1、下托;Sub-origin IIDs/IDs不能逆向传播至CA1。(3)首次出现CA3-和Sub-origin ID/IID的时间延迟无明显差异(P>0.05)。(4)两种起源IIDs/IDs的频率无明显差异(P>0.05),但Sub-origin IIDs/IDs的幅度明显小于CA3-origin IIDs/IDs的幅度(**P<0.01),且Sub-origin IDs的持续时间明显短于CA3-origin IDs的持续时间(*P<0.05)。第二部分:(1)BMT可逆性地阻断CA3-origin IDs,明显降低CA3-origin IIDs及Sub-origin IDs的频率(**P<0.01),而对Sub-origin IIDs的频率无明显影响(P>0.05)。(2)BIC可逆性地阻断CA3-origin IDs,明显降低Sub-origin IDs的频率(**P<0.01),而对两种起源IIDs的频率无明显影响(P>0.05)。(3)D-AP5不可逆地阻断Sub-origin IDs,而对Sub-origin IIDs及CA3-origin IDs/IIDs的参数无明显影响(P>0.05)。(4)BMT、BIC及D-AP5对两种起源IIDs的传播模式没有影响。(5)海马本部NKCC1的表达明显高于下托(**P<0.01),而NR2A/B的表达明显低于下托(**P<0.01)。第三部分:(1)PB不可逆地阻断Sub-origin IDs,明显降低Sub-origin IIDs的频率(**P<0.01);PB对CA3-origin IIDs/IDs的参数没有明显影响(P>0.05)。(2)PB对两种起源IIDs的传播模式没有明显影响。(3)PB联合BMT可逆性地阻断小鼠海马脑片上两种起源IIDs/IDs的发生。【结论】(1)与海马CA3区一样,下托是新生小鼠癫痫发生的又一致痫灶,且与海马本部具有相似的癫痫易感性。(2)由NKCC1导致的γ-氨基丁酸(gamma-aminobutyric acid,GABA)的兴奋性是海马本部起源癫痫样放电形成的主要因素,而下托起源的癫痫样放电则与NMDAR介导的谷氨酸能的兴奋性相关。(3)PB对起源于下托的癫痫样放电有明显的抑制作用,但对起源于海马本部的癫痫样放电抑制作用较弱。(4)BMT可明显增强PB对起源于下托和海马本部的癫痫样放电的抑制作用。