【摘 要】
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手足口病（Hand-foot-mouth disease,HFMD）是一种病毒性传染疾病,主要感染婴幼儿,成年人有时也会感染,是严重的公共卫生健康问题。引起手足口病的病毒有多种,肠道病毒71型、柯萨奇病毒A组4、5、9、10型以及B组2、5型。但是引起手足口病最常见的病毒为肠道病毒71型、柯萨奇病毒A组6型和A组16型。为了预防手足口病的暴发,研制手足口病的疫苗至关重要。重组蛋白疫苗因其安全性高,
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手足口病（Hand-foot-mouth disease,HFMD）是一种病毒性传染疾病,主要感染婴幼儿,成年人有时也会感染,是严重的公共卫生健康问题。引起手足口病的病毒有多种,肠道病毒71型、柯萨奇病毒A组4、5、9、10型以及B组2、5型。但是引起手足口病最常见的病毒为肠道病毒71型、柯萨奇病毒A组6型和A组16型。为了预防手足口病的暴发,研制手足口病的疫苗至关重要。重组蛋白疫苗因其安全性高,易于生产的优点,一直备受研究人员青睐。多肽疫苗因其生物安全性好,可以诱导高度特异性免疫反应的优点,也逐渐成为研发安全性疫苗的热点。本论文首先通过MEGA对NCBI网站上5616条CV-A6、3969条CV-A16、8818条EV71的VP1核苷酸序列分别进行氨基酸同源性分析,将分析结果利用PyMOL展示在蛋白结构上。根据优先筛选暴露在蛋白外侧和同源性高的原则,筛选出七条多肽,分别为:CV-A6-PEP1（S143-L150）:STTPGMLL、CV-A6-PEP2（K96-T106）:KDSGTSL DGYT、CV-A16-PEP3（P96-Y106）:PTTGTQNTDGY、CV-A16-PEP4（P142-Q149）:PNGELVPQ、EV71-PEP5（Y208-Y222）:YPTFGEHKQEKDLEY、EV71-PEP6（A139-Q152）:ACTPTGEVVPQLLQ和EV71-PEP7（P96-Y106）:PLKGTTNPNGY。将上述氨基酸序列合成肽段,用PBS溶解后,利用乙醇脱溶剂的方法制备成多肽纳米颗粒,并与等量的弗氏不完全佐剂混合,构建成多肽疫苗。其次,将构建的CV-A6-VP1-pFastBac Dual、CV-A16-VP1-pFastBac Dual和EV71-VP1-pFastBac Dual质粒分别转化到大肠杆菌DH10 Bac中进行重组,并将重组成功的杆状病毒感染SF9昆虫细胞,诱导表达出重组VP1蛋白。利用Ni柱亲和层析法纯化三种VP1蛋白,将纯化后的蛋白与等量的弗氏不完全佐剂混合,成功构建了手足口病重组VP1疫苗。最后,利用BALB/c小鼠为动物模型评估CV-A6-VP1、CV-A16-VP1、EV71-VP1和多肽纳米颗粒的免疫原性。ELISA结果显示,同种抗原的VP1重组蛋白和多肽分别免疫小鼠均可诱导出针对同种抗原的VP1重组蛋白以及相对应多肽的特异性抗体。本论文的研究结果将增进理解病原体蛋白和多肽抗原的设计,并为后续探索研制手足口病疫苗的工作提供基础依据。
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