膀胱癌是泌尿系统中最常见的恶性肿瘤之一,具有复发率高的特点,在诊断及术后常规需要进行膀胱镜检查,给患者带来了极大的痛苦。基于尿液的膀胱癌肿瘤生物标志物可以体外辅助膀胱癌的早期诊断,引起专家学者广泛关注。膀胱癌特异性核基质蛋白-4（BLCA-4）是从人膀胱肿瘤组织中分离出来的核基质蛋白,在膀胱癌的发展早期显示出表达升高,可辅助膀胱癌的早期诊断。临床上借助BLCA-4诊断膀胱癌具有极高的检测特异性及灵敏度,是一种理想的膀胱癌肿瘤标志物。本研究以BLCA-4蛋白为靶分子,利用噬菌体展示技术进行了五轮筛选,每轮增加筛选压力并随机挑选噬菌体克隆进行DNA测序,通过对多肽序列的富集情况进行分析,挑选出重复率最高的三条多肽序列。对第五轮48条噬菌体测序结果进行MEME Suite分析,同时挑选噬菌体克隆与靶蛋白进行噬菌体ELISA实验,确定了与BLCA-4亲和力最高的多肽序列为IPDPGFSPLVGF。BLCA-4抗原在膀胱癌细胞中特异性表达,因此,本文合成该多肽并用罗丹明B红色荧光进行标记,通过细胞免疫荧光实验检验多肽探针在细胞水平上与抗原的结合情况。结果显示,荧光标记多肽成功捕获到人膀胱癌细胞5637中的BLCA-4抗原,而在正常膀胱细胞及肠癌细胞中显示无阳性荧光信号,证明了在细胞水平上多肽与BLCA-4的结合。本研究建立基于多肽及BLCA-4抗体的BLCA-4夹心ELISA检测方法,优化了实验条件,最终在检测范围为0.375-24 ng/m L时与检测数值呈线性关系,回归方程式为y=0.1242 x+0.3146,相关系数R~2=0.9963;最低检测限为0.375 ng/m L,批间与批内变异率均在10%以内,同时检测四种其他种类蛋白抗原结果均为阴性。利用该方法检测6名膀胱癌患者与18名健康志愿者的尿液样本,符合率为100%。本课题筛选并合成BLCA-4特异性结合多肽,作为BLCA-4的探针进行了初步应用验证,为今后利用尿液样本研究开发早期诊断膀胱癌的方法和试剂盒提供了实验技术基础。