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第一部分Omentin-1对人成骨细胞增殖的作用及机制研究目的：网膜素(Omentin-1)是近年来发现的一种主要由网膜脂肪组织分泌的脂肪因子,研究表明Omentin-1参与调控胰岛素敏感性、心血管功能、炎症反应及骨代谢等生理过程。我们近期的研究发现Omentin-1在护骨素(OPG)基因敲除或卵巢切除的小鼠中通过调控成骨细胞增殖和分化发挥骨保护作用。但是关于Omentin-1对人成骨细胞(hOB)增殖的作用及相关机制的研究仍较少,本研究旨在检测Omentin-1对hOB增殖的影响及信号转导机制。方法：原代hOB取材于人的松质骨,用不同浓度Omentin-1(25,50,100,200ng/ml)干预48h,用[3H]胸腺嘧啶核苷酸掺入法评价细胞增殖的水平；Western Blot检测磷脂酰肌醇3激酶(P13K)下游底物Akt的活化；通过小分子干扰核糖核酸(siRNA)技术阻断Akt,联合P13K信号转导阻断剂LY294002和Akt信号转导阻断剂HIMO干预hOB后,观察Omentin-1对hOB增殖及信号转导机制的影响。结果：25-200ng/ml Omentin-1能促进hOB增殖,且呈浓度依赖效应,Omentin-1浓度为200ng/ml时,促进细胞增殖呈最大效应；Omentin-1能诱导Akt的活化,将Akt-siRNA转染至hOB后可阻断Akt蛋白的表达；此外,Akt-siRNA, LY294002和HIMO均可阻断Omentin-1的促成骨细胞增殖的效应。结论：Omentin-1能通过PI3K/Akt信号通路促进hOB增殖。第二部分Ghrelin对OPG基因敲除小鼠动脉钙化的影响目的：Ghrelin是一种由28个氨基酸组成的多肽,在体内发挥着促进生长激素释放,刺激摄食,调节能量代谢等方面的作用。血管平滑肌细胞(VSMCs)向成骨样细胞分化是动脉钙化的细胞学基础和关键环节。我们前期的研究发现Ghrelin通过细胞外信号调节激酶／细胞核因子κB受体活化因子配基(ERK/RANKL)和Akt/RANKL信号通路抑制小鼠VSMCs向成骨样细胞分化,本研究探讨Ghrelin对OPG基因敲除(OPG-/-)小鼠动脉钙化的影响。方法：OPG-/-小鼠每两周经尾静脉注射Ghrelin adenovirus(Ad-Ghr)或β-galactosidase adenovirus(Ad-Gal)或PBS,并分别分为Ghrelin组、阴性对照组及空白对照组,野生型(WT)小鼠每两周经尾静脉注射PBS作为WT组,8周后处死老鼠,分离鼠胸主动脉,western blot检测Ghrelin表达；茜素红染色及Vonkossa染色测定血管的钙化程度；分离主动脉弓到髂骨分支的动脉,比色法测动脉血管壁钙含量,对硝基苯酚法测动脉血管壁碱性磷酸酶(ALP)活性；免疫组化检测动脉血管壁骨钙素(OC)、RANKL及Runt相关转录因子2(RUNX2)的表达。结果：Ghrelin组小鼠Ghrelin的表达较其余三组的明显升高,说明Ghrelin腺病毒载体使小鼠成功过表达Ghrelin;茜素红和Vonkossa钙化染色均显示WT组小鼠未见明显钙化,Ghrelin组小鼠动脉仅出现轻度钙化,阴性对照组和空白对照组动脉出现明显钙化；与WT小鼠相比,OPG-/-小鼠主动脉血管壁钙含量及ALP活性明显升高,Ghrelin组小鼠动脉血管壁的钙含量及ALP活性较阴性对照组和空白对照组的明显降低。免疫组化提示与WT小鼠相比,OPG-/-小鼠动脉血管壁的OC、 RANKL、RUNX2的表达明显增多,Ghrelin组的小鼠动脉血管壁OC、 RANKL、RUNX2的表达较阴性对照组和空白对照组明显减少。结论：Ghrelin可减轻OPG-/-小鼠动脉钙化的发生,提示Ghrelin为动脉钙化的保护因子。