长白山白眉蝮蛇(Agkistrodonblomhoffiiussurensis)属于蝰蛇科蝮蛇亚科白眉蝮乌苏里亚种，俗名日本本蝮蛇(Manushi)，主要分布于我国东北部、朝鲜及俄罗斯的部分地区；蛇毒中的磷脂酶A2同源物(phospholipaseA2，PLA2)除了酶活性外，具有多种生物学活性，是蛋白质结构与功能研究的理想天然蛋白。 本研究以小白鼠的腹腔注射给药，无出血致死作为检测指标，采用HitrapSP阳离子交换、Superdex75凝胶过滤层析、SourceQ阴离子交换层析三步纯化方法，从长白山白眉蝮蛇蛇毒中纯化神经毒素，得率是3.25％；同时建立的抗毒素特异性IgY配基一步亲和层析纯化神经毒素，得率可达12.9％，是三步纯化方法的4倍。该蛋白质经变性聚丙烯凝胶电泳(SDS-PAGE)检测为一条带，与凝胶过滤测定的分子量相符，是单链多肽；质谱检测分子量为13881.85±0.33Da；等电聚焦测定等电点约为8.56。 通过对分离白眉蝮蛇神经毒素进行的氨基酸组成分析，N-端氨基酸测定，肽质谱指纹图谱分析，结合cDNA序列测定，确定了该毒素的一级结构，具有典型的第二类磷脂酶A2结构特征，第49位是Gln，是PLA2数据库中一个新的磷脂酶A2同源物，命名为Gln49-PLA2，它含有122个氨基酸残基，14个Cys，可能形成7对二硫键，与Asp49-PLA2s的同源性(93％-61％)高于Lys49-PLA2s(60％-56％)，进化树分析结果表明，Gln49-PLA2和Asp49-PLA2s的亲缘关系要近于Lys49-PLA2s。 Gln49-PLA2的体外卵磷脂为底物的PLA2酶活性检测、红细胞的直接和间接溶血活性检测、富含血小板血浆的抗凝血活性检测，大肠杆菌的抑菌实验，结果表明该蛋白质没有PLA2活性、溶血活性、抑菌活性，但具有抗凝血作用，浓度高于0.2mg/ml时，随物浓度的增加，复钙时间显著延长；氨基酸序列分析和三级结构模拟结果表明一级结构氨基酸残基序列的变化，特别是49位Gln残基取代Asp是PLA2水解活性丧失的主要原因，同时证明抗凝血活性位点与水解活性位点相互独立。 615小鼠腓肠肌注射Gln49-PLA2，注射剂量为0.1mg/只鼠时，3小时后血浆中肌酸激酶(CK)的含量是对照的20倍；注射部位的组织切片观察也表明该蛋白质具有肌肉毒性；肝素与毒素25℃预孵育20min后注射，血浆中的CK值降低了58％，说明肝素对该蛋白质的毒性有显著的抑制作用。 Gln49-PLA2对K562、Hela和HLF3种细胞株的生长影响，MTT和LDH方法检测表明该蛋白质有细胞毒性，半数致死量(LD50)分别是28.6μmol/L、1.3μmol/L和0.6μmol/L；当Gln49-PLA2浓度为4.35μmol/L时，与肝素等比例预孵育15min后加入培养的Hela细胞，活细胞数比单加等浓度Gln49-PLA2高39.6％，说明肝素对细胞毒性有拮抗作用。 Gln49-PLA2具有神经毒毒性，其LD50为18.2mg/kg；615小鼠腹腔注射Gln49-PLA2，热板实验表明该蛋白具有中枢神经镇痛活性，且镇痛活性与给药剂量成相关，对小鼠的镇痛作用，1.25mg/kg(i.p.)的给药剂量，约是盐酸哌替啶(30mg/kg)的1/20，以摩尔计算则是其1/880左右，纳洛酮对该神经毒素止痛效果有抑制作用，说明其镇痛作用可能阿片受体有关。