草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda是一种世界性农业害虫,危害寄主植物超过353种,对主要经济作物可造成毁灭性损害。中华甲虫蒲螨Pyemotes zhonghuajia是我国本土优势天敌,能有效地寄生鳞翅目、鞘翅目、膜翅目等害虫。有研究发现中华甲虫蒲螨寄生对草地贪夜蛾卵、幼虫、预蛹和蛹致死效果显著。目前,国内外有关中华甲虫蒲螨寄生对草地贪夜蛾免疫反应的抑制研究未见报道。本论文研究了中华甲虫蒲螨寄生对草地贪夜蛾细胞免疫反应和体液免疫反应的影响,并对被中华甲虫蒲螨寄生的草地贪夜蛾5龄幼虫进行转录组和蛋白组测序分析,鉴定出与免疫有关的差异基因和差异蛋白,为中华甲虫蒲螨寄生对草地贪夜蛾免疫反应的抑制机制研究提供理论支撑。1、中华甲虫蒲螨寄生对草地贪夜蛾免疫反应的影响草地贪夜蛾幼虫被中华甲虫蒲螨寄生后的细胞免疫和体液免疫能力降低。寄主幼虫的血细胞总数在被寄生后显著高于对照组,在寄生2 h达到最高,2 h后有所降低但仍显著高于对照组。同时,被中华甲虫蒲螨寄生后寄主血细胞延展率显著低于未被寄生的幼虫,且凋亡率明显高于对照组。此外,寄主血细胞的吞噬能力和包囊能力在被寄生后显著低于对照组,黑化作用的抑制程度加重,黑化率显著低于对照组,同时,酚氧化酶活性受到抑制,被寄生后的血细胞活性显著低于对照组。2、中华甲虫蒲螨寄生对草地贪夜蛾转录组表达水平的影响及免疫相关基因的鉴定利用真核无参转录组测序技术分别对10头和40头中华甲虫蒲螨寄生24 h后的草地贪夜蛾5龄幼虫和对照组进行转录组测序,获得的原始数据经质控后得到55309个Unigenes。将Unigenes比对到Nr、Pfam、Swiss-prot、KEGG和GO五个数据库进行功能注释,在五个数据库中共同注释的Unigene有360个。同源比对发现注释到斜纹夜蛾Spodoptera litura物种的Unigenes最多。对获得基因进行差异分析,结果发现:与对照组相比,在10头中华甲虫蒲螨寄生组中共鉴定到差异表达基因1287个,其中上调552个,下调735个;在40头中华甲虫蒲螨寄生组中共鉴定到差异表达基因1774个,其中上调777个,下调997个。两个处理组中都出现差异表达的基因共有138个,其中上调55个,下调83个。基于GO富集和KEGG富集分析,获得差异基因的分类功能和富集通路,鉴定与免疫相关基因,通过q RT-PCR分别验证了15个差异表达基因的相对表达趋势,结果有12个基因与转录组测序数据基本一致,说明转录组测序数据可靠。3、中华甲虫蒲螨寄生对草地贪夜蛾蛋白组表达水平的影响及免疫相关蛋白的筛查通过对被10头和40头中华甲虫蒲螨寄生24 h后的草地贪夜蛾5龄幼虫和无寄生组进行蛋白组测序,获得可定量蛋白4341个。对获得蛋白质进行差异分析,与对照组相比,在10头中华甲虫蒲螨寄生组中共鉴定到差异表达蛋白74个,其中上调有40个,下调有34个;在40头中华甲虫蒲螨寄生组中共鉴定到差异表达蛋白247个,其中上调有135个,下调有112个;两个处理组中都出现差异表达的蛋白共有97个,其中上调有51个,下调有46个。基于GO富集和KEGG富集分析,获得差异基因的分类功能和富集通路,鉴定与免疫相关蛋白。联合组学分析,与对照相比,10头中华甲虫蒲螨寄生组在两组学中共同上调的免疫蛋白为丝氨酸蛋白酶抑制剂-Z4,40头中华甲虫蒲螨寄生组在两组学中共同上调的免疫蛋白为小热激蛋白27.2,丝氨酸蛋白酶抑制剂77Ba,小热激蛋白,纤溶酶原激活物抑制剂2,巨噬细胞样,细胞色素P450和凝集素C型域。