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目的皮肤损伤愈合是一个复杂的过程,包括血液成分凝集、炎症、肉芽组织形成、新生上皮覆盖、结缔组织收缩和纤维化等过程。c-Jun氨基末端激酶(c-JunN-terminal kinase/stress-activated protein kinase,JNK/SAPK)为丝裂酶原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)家族的一个重要的亚族,可通过细胞性压力和炎症刺激发生磷酸化而激活,与重要的细胞反应有关,比如炎性反应和凋亡。本研究应用免疫组织化学和Western blot技术,检测小鼠皮肤损伤区切创后各时间段磷酸化JNK(phospho-JNK,p-JNK)的变化情况,探讨p-JNK在皮肤损伤愈合中的作用及其在损伤时间推断上应用的可能性。实验材料与方法健康成年(8周龄)清洁级昆明系小鼠55只,雌雄不限,体质量35～40g,随机分为11组。其中皮肤切创分为10个时间段组,另一组为正常对照组,每组均为5只小鼠。乙醚气体吸入麻醉,背部剪毛处理后,常规手术消毒,在背部中央做一纵行长1.5cm皮肤全层切口,深达筋膜。分别于伤后0h、3h、6h、12h、1d、3d、5d、7d、10d和14d将小鼠脱颈椎处死,耳义伤口处1.5cm×1.0cm皮肤组织。正常对照组小鼠麻醉后背部剪毛,不做切创,观察至14d,脱颈椎处死,取相同部位同等大小皮肤,以备HE染色、免疫组织化学染色和Western blot检测应用。应用免疫组织化学和Western blot技术检测55例小鼠皮肤切创后各时间段p-JNK变化情况,以非切创小鼠皮肤组织作对照,显微镜×400倍下,在损伤区及损伤周边区随机选取10个视野,计数细胞总数、阳性细胞数及阳性细胞率。应用Fluochem V2.0软件检测各时间段的平均灰度值,测得数据用均数±标准差((?)±s)表示。用SPSS13.0 for Windows进行单因素方差分析,以P<0.05为差异有统计学意义。结果正常对照组小鼠皮肤的表皮、毛囊及皮脂腺中表达p-JNK。皮肤切创伤后6h,可见少数多核粒细胞有p-JNK表达。伤后12～24h,大量浸润的多核粒细胞和部分单个核细胞p-JNK呈阳性。伤后1～3d随着时间的延长,p-JNK阳性细胞主要以单个核细胞为主。伤后5～14d p-JNK表达主要在成纤维细胞中。伤后0～3h,p-JNK阳性细胞率较低,随着伤后时间的延长,p-JNK阳性细胞率逐渐增加,1d达到高峰。伤后3～5d一直呈高表达状态。伤后7d p-JNK阳性细胞率达到第二峰,随后逐渐下降。除伤后3d与5d阳性细胞率无统计学差异外(P>0.05),其他各组与相邻上组的细胞总数及阳性细胞率差异均有统计学意义(P<0.05)。Westernblot结果显示正常对照皮肤内有p-JNK阳性条带。皮肤切创伤后各时间段组p-JNK表达强度有一定规律。伤后0～12h,阳性条带逐渐增强;1d,稍有下降;3d,p-JNK达到高峰。伤后5d、10d,较少;但伤后7d p-JNK相对较深。到伤后14d p-JNK阳性条带基本与正常对照组条带情况一致。除0h与正常对照组间平均灰度值差异无统计学意义外(P>0.05),其余各组间平均灰度值差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论1、正常对照组小鼠皮肤的表皮、毛囊及皮脂腺中表达p-JNK。2、小鼠皮肤切创愈合过程中多核粒细胞、单个核细胞及成纤维细胞表达p-JNK。3、小鼠皮肤切创愈合过程中p-JNK对诱导多核粒细胞、单个核细胞及成纤维细胞的凋亡可能具有调节作用。4、小鼠皮肤切创愈合过程中p-JNK表达的规律性变化可用于皮肤切创损伤时间的推断。