论文部分内容阅读
基因治疗在治疗癌症、帕金森综合症、白血病、艾滋病等目前用常规治疗方法无法完全治愈的疾病方面具有很好的前景,其有效性已经在临床中得到了验证。合适的基因载体是基因治疗能否成功的关键,目前应用最广的病毒载体和非病毒载体在转染效率和细胞毒性方面都有难以抑制的缺点。寻找一种高效低毒的基因载体是目前化学和生命科学领域的研究热点之一。本论文设计合成了一类氨基甲酸酯键连接的阳离子类脂,优化了各步合成反应的条件,所得中间体和最终产物全部经过~1H NMR,MS或GS-MS表征结构正确,纯度满足转染实验要求。通过实验测试或理论计算得到了所合成的阳离子类脂3a和3b的临界胶束浓度cmc、亲水亲油平衡值HLB、临界排列参数P和相转变温度T_m。将所合成的阳离子类脂制成阳离子脂质体,采用TEM、纳米粒度及电位分析仪等仪器对其状态进行研究,考察了类脂浓度、制备温度和临界排列参数P对所制备的脂质体的形态的影响,得到了以下规律:随着类脂浓度增大,其粒径和Zeta电位都有所增大;在相转变温度范围内,随着制备温度的不断升高,所制得的脂质体的平均粒径逐渐减小,Zeta电位不断增大,分散系数PDI逐渐减小;当制备条件相同时,制得的脂质体平均粒径相似,类脂的临界排列参数越小,其Zeta电位越大。还探讨了阳离子类脂3a和具有荧光的非离子表面活性剂F制备混合脂质体的可行性。本论文采用所制备的阳离子类脂作为基因运载工具,转运质粒DNA pGL3-control和pGFP-N2对COS-7细胞株、Hep-2细胞株以及Hepal-6细胞株进行细胞转染实验,以两种商品化基因转染试剂Lipofectamine2000及Sofast作为参照。通过转染效率和细胞毒性两个数据的衡量,证实了所合成的阳离子类脂3a在基因治疗方面的应用前景。针对阳离子类脂3a在小鼠肝细胞Hepal-6中转染效率较低这一现象,设计了两类连接有肝靶向性配体半乳糖的阳离子脂质体4a、4b和5a、5b,对它们的合成方法进行了探索,为后续研究提供了参考。