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流感病毒是最主要的呼吸性病原体之一。目前用于临床免疫人群的流感疫苗主要针对A型流感病毒表面糖蛋白血凝素(laemagglutinin，HA)和神经氨酸酶(neuraminidase，NA)诱导产生中和抗体，但由于HA和NA抗原转变和抗原漂移的多发性，且A型流感病毒亚型众多，因此需每年变更流感株预防其对人类的侵染。而流感病毒M2蛋白(matrix protein2，M2)的膜外区氨基酸序列(M2e)高度保守，且仅存在于A型流感病毒中，尽管此蛋白很少在流感病毒中表达，但其特异性抗体可在受感染动物血清中检测到，已初步证明其有交叉免疫保护功能，为流感病毒的医学诊断提供相应的依据。近年来高致病性禽流感的多次突发对人类生命和生活构成威胁，早发现，早隔离，早治疗是阻止流感病毒进一步传播的有效手段。目前国内尚无商品化试剂盒问世，所以研制出早期特异性诊断试剂尤为重要。
1.M2e单抗的制备：本试验采用碳化二亚胺法及MES缓冲体系合成M2e完全抗原，与福氏佐剂混合乳化作为免疫原，免疫8周龄BALB/c小鼠，取免疫后的小鼠脾淋巴细胞与SP2/0小鼠骨髓瘤细胞，PEG2000，作用融合，经三次有限稀释法克隆化筛选，共获得5株分泌抗A型流感。M2e单克隆抗体的杂交瘤细胞株，命名为：1G2，2F8，3D4，3H2，4F3。制备腹水，并纯化。
2.M2e单抗的免疫学鉴定：ELISA间接法测定小鼠抗血清、杂交瘤培养上清及腹水有效滴度分别为104以上、104及106以上，显示出这些单克隆抗体都有抗A型流感M2e的生物活性；连续传代、冻存、复苏数次后，1G2、2F8、4F3能稳定分泌抗M2e的抗体，分别命名为Ll，L2，L3：采用酶联免疫吸附试验，鉴定其免疫球蛋白类型及亚类型均为IgG类、IgGl亚类；采用正辛酸法及亲和层析法纯化腹水，得到单抗蛋白浓度依次为1.21、0.95、1.64mg/ml；各杂交瘤细胞平均染色体数目在93-97之间；用抗体稀释法，对L1及L3杂交瘤细胞抗体的亲和力进行分析，结果显示亲和力常数依次为2.96×105，3.28×105M-1。免疫印迹分析表明，三株单抗是针对流感M2e的特异性单克隆抗体。
3.构建流感双抗体夹心EIASA测定方法：应用抗M2e的单克隆抗体作为固相抗体，采用改良过碘酸钠法，对本室提供的流感多抗LM进行辣根过氧化物酶标记，作为标记抗体，建立流感双抗体夹心EISA检测模式。初步试验结果证明，与流感H5N2、H5N1、H9N2亚型流感病毒及流感基因工程抗原M2e(11-19，IRNEWGCRC)-HBC经ELISA鉴定结果均显示有较好的特异性。灵敏度达到19ng/ml，进一步的改进和完善，有望用于流感病毒感染的早期特异性诊断。
本研究采用化学合成免疫原，消除了采用基因工程抗原及天然抗原的生物安全性隐患，流感双抗体ELISA检测模式的成功建立，为开发流感早期诊断试剂提供了单抗支持。为研制具有交叉保护作用的流感疫苗提供参考。