论文部分内容阅读
目的：（1）通过对宫颈鳞癌和正常组织标本的检测，了解组织中长链非编码RNA MALAT1的表达水平，结合临床资料，评价MALAT1与宫颈鳞癌患者的临床病理特征、放疗敏感性及预后的关系。（2）选择四种宫颈癌细胞株，分别为Hela，CaSki， SiHa，HCC94以及人永生化表皮细胞 HaCaT，通过RT-PCR检测 MALATl在HeLa CaSki，SiHa，HCC94，HaCaT中的表达，通过筛选，选择表达水平最高的HeLa及CaSki两种细胞株，进一步了解MALAT1的功能。（3）通过对HeLa及CaSki两种细胞株磷酸化水平的检测，阐明MALAT1在宫颈癌中的作用机制，同时通过小鼠皮植瘤后行局部放疗了解MALAT1对放疗的影响。方法：（1）收集宫颈鳞癌组织60例及宫颈正常标本30例，采用RT-PCR法检测MALAT1的表达，结合患者临床病理特征、放疗敏感性、生存资料做统计分析。（2）选用Hela，CaSki，SiHa，HCC94以及人永生化表皮细胞 HaCaT进行MALAT1表达量的测定，筛选HeLa及CaSki高表达细胞株，沉默MALAT1利用TrensWell小室对宫颈癌细胞株的迁移、侵袭能力进行了检测。（3）采用western-bloting检测，沉默MALAT1的宫颈癌细胞株进行的关键通路的检测，探索其调控细胞生长的机制，小鼠皮下种植CaSki/NC、及CaSki/si-M1，通过局部放疗，比较放疗前后种植瘤的生长情况。结果：（1）1 MALAT1在宫颈癌组织中表达水平上调，MALAT1的表达与肿瘤分期，淋巴结转移状态有显著相关性，MALAT1表达上调与宫颈癌患者放疗敏感性差相关，MALAT1低表达的宫颈癌患者比MALAT1高表达者生存期长（2）四种宫颈癌细胞株，分别为Hela，CaSki，SiHa，HCC94以及人永生化表皮细胞 HaCaT，我们通过RT-PCR检测 MALATl在HeLa，CaSki，SiHa， HCC94，HaCaT中的表达水平，通过筛选，选择了表达水平最高的两种细胞株，HeLa以及 CaSki。沉默MALAT1能显著抑制HeLa和CaSKi细胞的增殖，集落形成和侵袭。（3）沉默MALAT1激活了HeLa和CaSKi细胞中ATM-CHK2的磷酸化水平，进一步说明MALAT1通过激活ATM-CHK2通路起到致癌作用。沉默MALAT1表达的CaSki/si-M1实验组细胞相对于对照组CaSki/NC细胞，放疗后皮下种植瘤缩小更明显。结论：通过本实验，我们初步从组织、细胞、水平上验证了MALAT1在宫颈鳞癌中起着致癌基因的功能，沉默MALAT1激活了HeLa和CaSKi细胞中ATM-CHK2的磷酸化水平，深化了对于MALAT1这一全新调控分子的认识，进一步阐明宫颈癌的致病机制。