长链非编码RNA MALAT1与宫颈癌临床病理特征、放疗疗效的相关性研究及其功能研究

来源 :新疆医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:kekezhu99
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目的:(1)通过对宫颈鳞癌和正常组织标本的检测,了解组织中长链非编码RNA MALAT1的表达水平,结合临床资料,评价MALAT1与宫颈鳞癌患者的临床病理特征、放疗敏感性及预后的关系。(2)选择四种宫颈癌细胞株,分别为Hela,CaSki, SiHa,HCC94以及人永生化表皮细胞 HaCaT,通过RT-PCR检测 MALATl在HeLa CaSki,SiHa,HCC94,HaCaT中的表达,通过筛选,选择表达水平最高的HeLa及CaSki两种细胞株,进一步了解MALAT1的功能。(3)通过对HeLa及CaSki两种细胞株磷酸化水平的检测,阐明MALAT1在宫颈癌中的作用机制,同时通过小鼠皮植瘤后行局部放疗了解MALAT1对放疗的影响。方法:(1)收集宫颈鳞癌组织60例及宫颈正常标本30例,采用RT-PCR法检测MALAT1的表达,结合患者临床病理特征、放疗敏感性、生存资料做统计分析。(2)选用Hela,CaSki,SiHa,HCC94以及人永生化表皮细胞 HaCaT进行MALAT1表达量的测定,筛选HeLa及CaSki高表达细胞株,沉默MALAT1利用TrensWell小室对宫颈癌细胞株的迁移、侵袭能力进行了检测。(3)采用western-bloting检测,沉默MALAT1的宫颈癌细胞株进行的关键通路的检测,探索其调控细胞生长的机制,小鼠皮下种植CaSki/NC、及CaSki/si-M1,通过局部放疗,比较放疗前后种植瘤的生长情况。结果:(1)1 MALAT1在宫颈癌组织中表达水平上调,MALAT1的表达与肿瘤分期,淋巴结转移状态有显著相关性,MALAT1表达上调与宫颈癌患者放疗敏感性差相关,MALAT1低表达的宫颈癌患者比MALAT1高表达者生存期长(2)四种宫颈癌细胞株,分别为Hela,CaSki,SiHa,HCC94以及人永生化表皮细胞 HaCaT,我们通过RT-PCR检测 MALATl在HeLa,CaSki,SiHa, HCC94,HaCaT中的表达水平,通过筛选,选择了表达水平最高的两种细胞株,HeLa以及 CaSki。沉默MALAT1能显著抑制HeLa和CaSKi细胞的增殖,集落形成和侵袭。(3)沉默MALAT1激活了HeLa和CaSKi细胞中ATM-CHK2的磷酸化水平,进一步说明MALAT1通过激活ATM-CHK2通路起到致癌作用。沉默MALAT1表达的CaSki/si-M1实验组细胞相对于对照组CaSki/NC细胞,放疗后皮下种植瘤缩小更明显。结论:通过本实验,我们初步从组织、细胞、水平上验证了MALAT1在宫颈鳞癌中起着致癌基因的功能,沉默MALAT1激活了HeLa和CaSKi细胞中ATM-CHK2的磷酸化水平,深化了对于MALAT1这一全新调控分子的认识,进一步阐明宫颈癌的致病机制。
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