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本试验以5个苜蓿品种为试材,采用花药培养的方法,对诱导花药再生植株的影响因素、提高花培植株获得率的方法、花培植株继代培养、生根移栽技术以及花培植株的倍性进行了研究,旨在建立苜蓿花药培养技术体系。研究结果如下:1.在愈伤组织诱导能力方面,不同基因型苜蓿品系之间存在很大差异。供试的5个基因型的苜蓿材料都获得了愈伤组织,但是不同基因型之间存在很大的差异,它们的愈伤组织诱导能力大小依次为L286、WL141、SA16465、L37、AURORA。2.全面设计的分析结果表明,基本培养基和蔗糖浓度对花药愈伤组织诱导及发育有很大的影响。就单一因素而言,NB培养基较其它的培养基对愈伤组织的诱导效果好。相对低浓度2.4-D(0.5 mg/L)与(KT、BA)配合使用有利于愈伤组织及芽的形成,最适合的诱导愈伤组织培养基组合是NB+2.4-D 0.5mg/L+NAA 0.3mg/L +6-BA 0.5 mg/L +KT 3.0 mg/L。不同培养基所适合的蔗糖浓度不同,NB培养基的最佳蔗糖浓度为6%。在一定范围内高浓度的蔗糖有利于单倍体愈伤组织的诱导而抑制体细胞愈伤组织的诱导。3.全面设计的分析结果表明,变温处理对苜蓿花培愈伤组织的诱导有促进作用。就单一因素而言,33℃高温处理48h-72h对愈伤组织的诱导效果最好,4℃低温处理24h对愈伤组织的诱导效果最好。不同高温处理时间所对应的最适低温处理时间是不同的,高温处理24h和72h所对应的最适低温处理时间为48h,高温处理48h所对应的最适低温处理时间为24h。低温处理24h-48h有利于降低愈伤组织的褐化率。4.对愈伤组织进行低温处理能提高愈伤组织的分化率,最适合的低温处理为4℃处理24h。5.BA和NAA配合使用时较易诱导愈伤组织分化,但其浓度比不宜过大,当其浓度为BA0.2mg/L、NAA 2mg/L和BA0.2mg/L、NAA3mg/L时分化率最高,分别为40%和54%;不加任何激素或只加BA时,几乎不能诱导愈伤组织分化;当KT和NAA配合使用时也有利于愈伤组织的分化,其分化率可达到36%。6.在一定范围内,分化芽成苗率随培养基水分含量的增加而降低。结果表明,琼脂含量为1.2%的培养基既能满足再生芽萌发所需要的干燥环境,又能保证再生芽萌发所需水分,是较适合成苗的培养基。7.MS+2%蔗糖+0.5%琼脂是苜蓿花培植株继代和复壮培养最适宜的培养基。1/2 MS(MS)+NAA0.1mg/L+1%蔗糖+0.5%琼脂是花培植株适宜的生根培养基。不同基因型材料花培植株的移栽成活率有一定差异。8.经根尖染色体计数法对花培植株进行鉴定发现花培植株为单倍体、双单倍体、高倍体的混合群体,双单倍体占绝大多。