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目的:研究M3受体激动剂胆碱对豚鼠心室肌细胞L型钙通道的影响。
方法:(1)酶解法分离豚鼠单个心室肌细胞,采用全细胞膜片钳技术记录M3受体激动剂胆碱对豚鼠单个心室肌细胞L型钙通道电流(ICa-L)的影响。(2)激光扫描共聚焦显微技术观察胆碱对豚鼠单个心室肌细胞内钙离子的作用。
结果:(1)膜片钳结果显示:10 mmol/L胆碱能够明显抑制,ICa-L,使其电流峰密度从(9.02±0.82)pA/pF减少到(5.61±0.55)pA/pF(n=4,p<0.01),5 nmol/L4-DAMP能够使其恢复至(8.12±0.65)pA/pF(n=4,p<0.01)。胆碱可使ICa-L的I-V关系曲线上移,其形状和峰值电压保持不变;胆碱还可使通道的激活曲线右移,V1/2由给药前的(-21.40±1.12)mV减少到(-18.62±1.14)mV(n=6,P<0.05);5nmol/L4-DAMP使其恢复到(-21.81±1.78)(n=6,P<0.05)。但失活曲线和失活恢复时间无改变。(2)激光扫描共聚焦检测细胞内钙的结果表明:10 mmol/L胆碱可以抑制KCl除极诱导的心肌细胞内钙的升高幅度(n=9,P<0.01),5nmol/L的4-DAMP可以阻断这一作用(n=8,P<0.01)。
结论:M3受体激动剂胆碱通过延长L型钙通道激活过程而明显抑制,ICa-L,减少细胞外的钙离子内流,降低心肌细胞内钙,从而发挥抗心律失常作用。