耐甲氧西林葡萄球菌mecA基因地高辛标记核酸探针的制备及应用

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耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)是引起医院感染的一种主要病原菌,严重危害人类健康。尽管医学研究领域已对MRS进行了大量的研究,但目前MRS尚未引起兽医工作者的重视。mecA基因作为MRS的分子标志,在葡萄球菌属中广泛分布,目前在葡萄球菌属以外的细菌中尚未检出,因此CLSI将检测mecA基因作为鉴定MRS的金标准。   为了解MRS在畜禽间的存在情况,本试验从畜禽体表及体内分离葡萄球菌,筛选出MRS,对其进行药敏试验,以了解其耐药性,为兽医临床合理用药提供参考。同时,建立了针对mecA基因片段的PCR和核酸探针方法,并分别对葡萄球菌分离株进行检测,以明确耐甲氧西林葡萄球菌在畜禽中的携带情况。   本研究从鸡、猪、兔、犬的体表及体内分离出75株葡萄球菌,通过生化编码鉴定系统鉴定,主要是金黄色葡萄球菌、木糖葡萄球菌、表皮葡萄球菌、溶血葡萄球菌、猪葡萄球菌。通过头孢西丁纸片扩散法筛选出40株MRS,占葡萄球菌分离株的53.3%。药敏试验的结果显示,耐甲氧西林葡萄球菌菌株对万古霉素、头孢唑啉、阿米卡星等少数几种药物较敏感,有55.0%以上的MRS对青霉素G、氨苄青霉素、四环素、红霉素、克林霉素、氯霉素、诺氟沙星、环丙沙星耐药,未发现万古霉素耐药菌株。   建立了针对mecA基因片段的PCR检测耐甲氧西林葡萄球菌的方法。用PCR方法对75株葡萄球菌分离株进行检测,检出42株MRS,占56.0%,该方法与头孢西丁纸片扩散法的总符合率为97.3%。   建立了针对mecA基因片段的地高辛标记核酸探针方法。用该方法对75株葡萄球菌分离株进行检测,检出47株MRS,占62.7%,该方法与PCR方法的总符合率为93.3%,与头孢西丁纸片扩散法的总符合率为90.7%。   通过本研究证实,在畜禽的体表及体内能够分离到MRS,且有较高的分离率(经不同的方法检测为53.3%~62.7%),动物源性MRS耐药严重呈现多重耐药,应该引起兽医工作者的足够重视。本研究建立了用核酸探针检测MRS的方法,可以对大量样本进行检测,为防止MRS在畜禽间流行奠定基础,从公共卫生的角度讲,也为防止MRS通过接触或食源等途径从动物传播给人类提供依据。
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