目的：结核病是仅次于艾滋病的第二大致死性传染病。1993年，WHO宣布“全球进入结核病紧急状态”，1998年WHO再次提出“遏制结核病的行动刻不容缓”。结核杆菌是目前发现唯一具有蛋白酶体的致病菌。蛋白酶体在细菌生长过程中对蛋白质的降解调控起重要作用。现有研究证实蛋白酶体可作为新型抗结核药物作用的靶标。本研究拟建立结核杆菌蛋白酶体抑制剂体外筛选模型，并利用该模型对天然化合物的蛋白酶体抑制活性进行评估。　　方法：根据荧光底物SuC-Leu-Leu-Val-AMC(S-LINY-AMC)在蛋白酶体作用下发生水解，可释放出具有荧光的AMC(7-氨基-4-甲基香豆素)的原理，建立了蛋白酶体抑制剂筛选模型。通过绘制结核杆菌蛋白酶体的酶反应进程曲线及酶浓度对反应速率的影响来评价蛋白酶体酶反应动力学，进而优化反应体系中蛋白酶体粗提物的浓度、S-LLVY-AMC浓度及反应时间，并利用已知的蛋白酶体抑制剂MG132作为阳性对照，以评价反应体系的稳定性，建立结核杆菌蛋白酶体抑制剂体外筛选模型。通过建立的模型，从分子水平评估100种天然化合物对结核杆菌蛋白酶体的抑制活性。进而在分子水平上评价筛选出的天然化合物对真核细胞蛋白酶体的抑制活性。通过绘制天然化合物对真核细胞蛋白酶体活性的抑制率曲线，计算出天然化合物作用的IC50。再利用MTT法检测17种天然化合物对真核细胞增殖的抑制效应，以明确各化合物的细胞毒性。　　结果：①成功的建立了结核杆菌蛋白酶体抑制剂体外筛选模型。②应用该模型评估100种天然化合物对结核杆菌蛋白酶体的抑制活性，发现其中17种天然化合物在200μM时对结核杆菌蛋白酶体抑制率可达50％以上，分别为：大黄素、汉黄芩素、汉黄芩苷、槲皮素、鞣花酸、山奈酚、杨梅素、异甘草素、淫羊藿苷、α-倒捻子素、大蓟苷、黄芩素、紫草素、姜黄素、黄芩苷、高车前素、雷公藤红素。③综合17种天然化合物对结核杆菌及真核细胞蛋白酶体抑制活性结果，得出汉黄芩素、汉黄芩苷、黄芩苷、大蓟苷、黄芩素与α-倒捻子素对结核杆菌蛋白酶体的抑制作用强于真核蛋白酶体。6种天然化合物对结核杆菌蛋白酶体的IC50分别是170.6μM、139.7μM、83.05μM、45.13μM、42.5μM、96.5μM，对于真核细胞蛋白酶体的的IC50分别是200μM、192μM、93.65μM、46.97μM、120μM、123.9μM。其中黄芩素对结核杆菌蛋白酶体的IC50仅为真核细胞蛋白酶体IC50的1/3，并且其对真核细胞毒性较低。④通过天然化合物的研究分析，发现天然化合物对蛋白酶体活性有抑制作用的多属黄酮类。　　结论：成功建立了结核杆菌蛋白酶体抑制剂筛选模型，该模型为今后从天然化合物或人工合成物中筛选有效的抑制剂提供简便、快速的方法。