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研究背景：涎腺腺样囊性癌(Salivary Adenoid Cystic Carcinoma, SACC)是较为常见的涎腺恶性肿瘤之一,好发于小涎腺及大涎腺中较小的腺体,约占涎腺上皮性肿瘤的11%,约占涎腺恶性肿瘤的27%。可发生于任何年龄,以40-60岁居多,无明显性别差异。SACC生长缓慢,侵袭性强,容易向神经、血管和骨呈浸润和破坏性生长,术后常有复发。SACC区域淋巴结转移少见,可发生肺、骨、脑和肝等远处转移,致患者术后生存率低,预后较差。因此,寻找针对SACC的新疗法和低毒高效的抗癌药物势在必行。植物激素(plant hormone)又称植物天然激素或植物内源性激素,是一类有机物质,由植物自身代谢产生,自产生部位移动到作用部位,在极低浓度下就可显示出明显的生理效应。茉莉酸(Jasmonic Acid, JA)及其甲酯(Methyl Jasmonate, Me-Ja)在植物界广泛存在,已被第16届(1999年)国际植物生长会议接受为新一类的植物激素,是调节高等植物发育、应答外界刺激(尤其是创伤)、调节基因表达的一类内源性信号分子。近年来的研究表明,JA可致使人淋巴细胞白血病细胞Molt-4株死亡,抑制人乳腺癌MCF-7细胞株、黑色素瘤SK-28细胞株和前列腺癌LNcaP细胞株增殖,而Me-Ja能够导致以上各种细胞株死亡。Me-Ja还能抑制口腔鳞癌细胞、肝癌细胞、神经母细胞瘤细胞的生长,诱导其发生凋亡。鉴于不同细胞对其敏感性存在差异,本研究选择人涎腺腺样囊性癌ACC-2细胞株进行实验,观察Me-Ja对ACC-2细胞的作用,为其治疗SACC提供实验理论依据。目的：本课题以腺样囊性癌ACC-2细胞为研究对象,通过体外实验研究,从细胞和分子水平上观察Me-Ja对ACC-2细胞株的作用,探讨其可能存在的机制,为Me-Ja抗SACC作用的进一步研究提供理论以及实验依据。方法：1.体外培养ACC-2细胞,运用CCK-8法筛选茉莉酸甲酯的有效作用浓度及增值抑制率测定；倒置显微镜观察各组细胞形态变化；透射电镜下观察各组细胞的超微结构；流式细胞术检测细胞周期分布。2.应用RT-PCR技术及免疫细胞化学SP法分别检测各组ACC-2细胞中Bcl-2、Bax mRNA和蛋白的表达强度。3.实验分组：空白对照组、5-Fu组、Me-Ja组、Me-Ja+5-Fu组。结果：1.CCK-8法检测各浓度梯度Me-Ja作用不同时间对ACC-2细胞增殖抑制率结果：Me-Ja对ACC-2细胞具有增殖抑制作用,这种作用随Me-Ja作用浓度的增加、作用时间的延长而增大,呈现浓度和时间依赖性。2. Me-Ja对ACC-2细胞的半数抑制浓度IC50结果：Me-Ja对ACC-2细胞半数抑制浓度IC50为9.20μmol/L。后续试验Me-Ja浓度采用1/2IC50,即4.6μmol/L。3.倒置显微镜下观察Me-Ja作用后ACC-2细胞的形态学变化结果：空白对照组：ACC-2细胞贴壁生长,细胞呈梭形、多边形,异型性明显。5-Fu组和Me-Ja组及联合作用组均可见部分细胞脱落,贴壁细胞明显减少。Me-Ja+5-Fu组脱落细胞更多,贴壁细胞数目较单药作用组更少。4.CCK-8法检测各组ACC-2细胞增殖抑制率结果：5-Fu组为44.22%,Me-Ja组为44.92%,Me-Ja+5-Fu组为49.30%。5-Fu与Me-Ja单独作用组之间相比,P>0.05,联合作用组与单药作用组相比P<0.05,说明5-Fu与Me-Ja单独作用对ACC-2细胞的增值抑制率无明显差别,联合用药效果优于单独用药。5.透射电镜下观察各组ACC-2细胞超微结构结果：空白对照组ACC-2细胞幼稚,分化程度低,增殖力强,属恶性肿瘤细胞的典型特征。5-Fu组和Me-Ja组及联合作用组均可见到部分细胞表面微绒毛消失,细胞之间连接变少甚至消失,部分细胞呈现凋亡改变,联合作用组尤其明显。6.流式细胞术检测各组ACC-2细胞周期分布结果：空白对照组：ACC-2细胞有40.8%处于G1期,有24.6%处于S期；5-Fu组：有55.9%的细胞处于G1期；17.2%的细胞处于S期；细胞阻滞于G1期；Me-Ja组：62.1%的细胞处于G1期,17.3%的细胞处于S期,细胞也阻滞于G1期；亚二倍体峰出现,说明部分细胞出现凋亡。Me-Ja+5-Fu组：61.2%的细胞处于G1期,仅7.1%的细胞处于S期,细胞G1期阻滞效果更明显,典型凋亡亚二倍体峰可见,更多细胞出现凋亡。7. RT-PCR法检测各组ACC-2细胞Bcl-2和Bax mRNA表达结果：Me-Ja、5-Fu和Me-Ja+5-Fu分别作用48h后,ACC-2细胞内Bcl-2mRNA的表达水平相对空白对照组均明显下降(P<0.05),而Bax mRNA的表达水平相对空白对照组明显升高(P<0.05)。8.免疫细胞化学SP法检测Bcl-2和Bax蛋白结果：Me-Ja、5-Fu和Me-Ja+5-Fu分别作用48h后,各实验组ACC-2细胞内Bcl-2蛋白在胞浆中表达水平均明显低于对照组(p<0.05),而Bax蛋白的表达水平较对照组也明显增加(P<0.05)。结论：茉莉酸甲酯明显抑制人涎腺腺样囊性癌ACC-2细胞的增殖,细胞周期发生阻滞,促进细胞凋亡,具有抗腺样囊性癌ACC-2细胞作用；茉莉酸甲酯可能通过下调Bcl-2mRNA和蛋白的表达,上调Bax mRNA和蛋白的表达,进而下调Bcl-2/Bax比率,达到诱导ACC-2细胞发生凋亡作用的。