产γ-氨基丁酸乳酸菌的选育及gadB的表达

来源 :福建师范大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:zhangfegnlin
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
γ-氨基丁酸(y-aminobutyric acid,GABA)是谷氨酸经谷氨酸脱羧酶(glutamate decarboxylase,GAD)α-脱羧形成的一种非蛋白质氨基酸,广泛存在于动植物和微生物细胞中。GABA作为一种抑制性神经递质具有多种生理功能,能够降低血氨,抗抑郁,治疗糖尿病,促进酒精代谢和消臭,以及促进生殖等,在食品、医药及养殖行业中应用广泛。首先,筛选获得一株培养72 h,GABA产量为2.461g/L的乳酸菌。利用碳酸钙-溴甲酚绿平板结合高效液相色谱法(HPLC)从陈年泡菜汁中筛选获得一株GABA产量较高的菌株FJNU-GA01,基于形态学特征、生理生化指标及16S rDNA序列分析,鉴定该菌株为乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)。其次,采用单因素试验、部分析因试验和中心复合设计优化L. lactis FJNU-GA01的培养体系。确定以葡萄糖12.46 g/L、谷氨酸钠15.80 g/L、磷酸氢二钾0.49 g/L、胰蛋白胨4 g/L、蛋白胨16 g/L和硫酸镁1.6 g/L(初始pH:7.5)为培养基,按9%接种量,在转速60 r/min、温度30℃的条件下培养72 h,GABA产量从2.461 g/L提高到7.539 g/L,提高了206.3%。再次,探讨了L. lactis FJNU-GA01全细胞催化生产GABA的工艺。确定采用含20g/L谷氨酸钠的乙酸-乙酸钠缓冲液(pH4.2,0.3mol/L)重悬以5.81g/L葡萄糖、12.04 g/L玉米浆粉、5g/L蛋白胨、10.67 g/L谷氨酸钠、1.5 g/L磷酸氢二钾和0.5 g/L硫酸镁为培养基培养12h获得的菌体(菌体浓度25 g/L),在温度50℃、转速150 r/min的条件下催化反应4 h,GABA产量从3.080 g/L提高到9.360 g/L,提高了203.9%。采用三级培养方式进行10T罐放大中试培养菌体细胞,2T罐转化,GABA产量达到12 g/L。最后,构建高效转化谷氨酸生产GABA的大肠杆菌工程菌。根据NCBI上公布的谷氨酸脱羧酶B基因序列设计引物克隆L. lactis FJNU-GA01的gadB,将其与pET-28a(+)载体连接,转化E.coli BL21(DE3),获得产GABA的工程菌。以1mmol/L的IPTG为诱导剂,30℃诱导培养12h的工程菌转化L-谷氨酸,GABA的产量最高可达327.01 g/L。
其他文献
小学数学中,有意识的培养小学生的数学除法计算能力是非常有必要的,其对锻炼小学生的思维能力和总结能力,提高小学数学教师的除法计算辅导效率和辅导质量,激发学生数学学习兴趣等
1921年我出生在上海。父亲孙柞型是南京路英商伊文思图书公司的总经理。母亲董秋云是南京路(劳合路口)董生昌婚服店的女小开。他们都是与洋人打交道的企业经营人员。从学徒升
高中数学复习课教学是高中数学教学的重要内容,为此,本文将在仔细分析高中数学复习课教学常陷入的误区的基础上,较为深入地摊究一下高中数学复习课教学的实效性,旨在为今后高中数
抗战时期,许多著名作家都辗转流亡到重庆。曹禺、张骏祥、陈白尘等在重庆组织话剧团体,掀起了话剧热,中华剧艺社应运而成立,话剧的四大名旦张瑞芳、秦怡、苏绣文3人也是中华剧艺社的当家台柱。  1942年6月27日,中华剧艺社排好郭沫若的新作历史剧《屈原》,准备到重庆的北碚作露天公演。哪知天公不作美,天天细雨蒙蒙。戏票上不得不印出“恕不退票,遇雨顺延”几个字。在演出前夕,郭沫若从重庆市赶到北碚,抱去一个自
她是一个谜,高贵神秘;她的微笑,似有还无。几个世纪以来,人们对她议论纷纷,艺术家们为她折服。她——《蒙娜丽莎》,一个似乎无法破译的密码,即将揭开神秘的面纱……
期刊
随着新课改的不断深入和发展,创新教学模式被广大教师广泛使用,打破传统枯燥、单一的教学模式,让学生在自由轻松的课堂上发挥思维能力和创新能力。因此,高中语文老师应当采用
当哈利·波特迷闭上眼睛,在脑海中描绘这位前额有道闪电疤痕的少年巫师时,很多人可能马上就会联想到丹尼尔·拉德克利夫。大部分与他同龄的演员尚未够资格出传记(而
期刊
多亏了一款新型互联网雨伞,今后下雨天再也不会无聊乏味了。这种高科技的雨伞使你能通过内置相机进行拍照,通过无线网络连接上传到图片共事网站Flickr.com。在两分钟之内,只
期刊
艾薇儿·拉维尼1984年9月27日出生于加拿大安大略省纳帕尼镇。她上完 11年级后签下一张唱片就从高中辍学了。艾薇儿快18岁时,她在名为《放手》的首张专辑中推出了歌曲《
期刊
在EXcel表格中偶尔会碰到单元格中的日期或电话号码数据忽然整列都变成“####”或类似“1.306E+10”的错误,这究竟是什么情况呢?难道我的数据出了问题?