论文部分内容阅读
【目的】研究实验性光损伤小鼠视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelium，RPE)中金属蛋白酶组织抑制物-1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1，TIMP-1)表达的变化，以及促红细胞生成素(erythropoietin，EPO)对其的影响，探讨EPO对视网膜光损伤发挥保护作用的机制。【方法】52只健康成年近交系BALB／C小鼠，随机分为单纯光照组(24只)、EPO处理组(24只)和正常对照组(4只)3组。其中前两组按光照后处死时间的不同又各自分出6h、12h、36h、72h、96h和7d6个亚组，置于6000LUX光照箱中照射4h，EPO处理组小鼠光照前2小时腹腔注射重组人促红细胞生成素(recombination human erythropoietin，rHuEPO)，剂量为5000U／kg。采用苏木素-伊红(HE)染色观察RPE细胞形态学变化、免疫组织化学法检测其TIMP-1、细胞外信号调节激酶(ERK-1)蛋白的表达。【结果】(1)形态学发现：正常小鼠视网膜RPE细胞呈单线状排列，细胞形态规整。单纯光照后12小时，RPE细胞排列疏松；光照后36小时，RPE细胞明显肿胀、边界不清、形态不规则；光照后7天，RPE细胞出现丢失、双层现象。EPO处理组小鼠视网膜组织学改变较晚发生且不明显，并且未见明显细胞丢失、双层现象。(2)TIMP-1免疫组化发现：正常小鼠视网膜RPE细胞中TIMP-1弱阳性表达。单纯光照组光照后各时间段TIMP-1阳性表达无明显变化。EPO处理组TIMP-1较单纯光照组表达明显增强，光照后12小时，RPE层可见明显TIMP-1阳性表达，随着光照后时间的推移，阳性RPE细胞棕黄色染色强度递增，光照后96小时TIMP-1表达强度达到高峰。(3)ERK-1免疫组化发现：正常小鼠视网膜组织无ERK-1阳性表达。单纯光损伤后RPE细胞ERK-1表达较正常对照无明显改变。EPO处理后，从光照后6h起，各亚组均可见到阳性表达细胞，且随光照后时间的推移阳性表达呈现逐渐递增的趋势，光照后72h表达强度达到高峰，光照后7天ERK-1阳性表达强度降低。【结论】光损伤可以造成小鼠视网膜RPE细胞渐进性的破坏，同时RPE细胞TIMP-1的表达在损伤过程中没有明显的变化。外源性的EPO可以促进光损伤后视网膜RPE细胞TIMP-1的表达的增加，有利于MMPs／TIMP平衡的恢复，进一步证实EPO对视网膜光损伤的保护作用。EPO对RPE细胞TIMP-1分泌和表达的调节可能是经由MAPK途径。